商品介紹：

產品屬性：

中文名稱：MEK1/2變構抑制劑（PD318088）

英文名稱：PD318088

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研

細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調控；

⑤細胞分化及其調控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

桔橙鏈霉菌Marinospirillum minutulum兔子脫氧吡啶/脫氧吡啶啉(DPD)

黃曲霉Marinospirillum megaterium兔子組織因子(TF)

巴氏醋桿菌Bacillus subtilis subsp. subtilis兔子組織因子(TF)

大腸埃希菌Natrinema versiforme兔子骨膠原交聯(Cr)

發酵乳桿菌*Rhizobium undicola兔子骨膠原交聯(Cr)

葡萄座腔菌Natronorubrum tibetense兔子組織多肽抗原(TPA)

氧化節桿菌Brevibacillus laterosporus兔子組織多肽抗原(TPA)

白色假絲酵母Brevibacillus laterosporus 兔子組織型纖溶原激活劑(t-PA)

植物乳桿菌Halobacterium sp. 兔子組織型纖溶原激活劑(t-PA)

膠孢Burkholderia caryophylli兔子組織多肽抗原(TPA)

金龜子綠僵菌Lactobacillus gasseri兔子組織多肽抗原(TPA)

多正青霉Lactobacillus casei兔子組(HIS)

Achromobacter insolitus Streptococcus thermophilus兔子組(HIS)

立枯絲核菌Flavobacterium omnivorum兔子轉化生長因子β1(TGF-β1)

雜色曲霉原變種Flavobacterium xinjiangense兔子轉化生長因子β1(TGF-β1)

枯草芽孢桿菌Flavobacterium xinjiangense兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)  

血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體粘金黃菌（不提供）沙門氏菌

L-型電壓依賴型鈣通道α抗體動物乳桿菌埃森沙門氏菌

血管內皮生長因子D型抗體簡單類諾氏菌馬流產沙門氏菌

極低密度脂蛋白受體抗體成團芽球菌湯卜遜沙門氏菌柏林變種
MEK1/2變構抑制劑（PD318088）平菇 

粉紅擲孢酵母 胰凝乳蛋白原

孟加野野村氏 辛弗林

禾生盤孢 纖維透析袋（500-1000）

產氣莢膜梭 C型 乙酰酯（蒼蠅頭部）

粉紅單端孢 熊果苷

細鏈格孢 熊果酸

產紅青霉 丁酰酯