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轉(zhuǎn)染試劑那些事兒
閱讀：3819 發(fā)布時(shí)間：2020-3-17轉(zhuǎn)染技術(shù)新寵-陽(yáng)離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)
適用宿主廣泛，操作簡(jiǎn)便，細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染率高。其中聚乙烯亞胺（PEI）的轉(zhuǎn)染性能比較好。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔兩個(gè)碳原子，就是第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何PH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體。這種聚陽(yáng)離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，而且細(xì)胞毒性低。大量實(shí)驗(yàn)證明，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設(shè)計(jì)更復(fù)雜的基因載體時(shí)，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。
線性聚乙烯亞胺（Line PEI）轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性低，有利于細(xì)胞定位，而且轉(zhuǎn)染率*。
Polyscience公司的兩款明星產(chǎn)品線性聚乙烯亞胺（23966-1和24765-1）近年來(lái)越來(lái)越多的受到研究者們的青睞。其產(chǎn)品被運(yùn)用到大量的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，也出現(xiàn)在大量的文獻(xiàn)中。
Polyscience公司成立于1961年，總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓，是一家生產(chǎn)研發(fā)化學(xué)產(chǎn)品的公司。該公司的產(chǎn)品種類(lèi)已經(jīng)累計(jì)超過(guò)3000種，其產(chǎn)品的特點(diǎn)是體積小，附加值高。
公司產(chǎn)品主要包含：
- 單體和聚合物
- 微球和粒子（有機(jī)、無(wú)機(jī)、可生物降解、磁珠、熒光素、染料、特異性抗體和蛋白包被顆粒，直徑從40nm到10mm）用于核酸提取、蛋白分離和純化等。
- 高性能粘合劑、涂料和密封劑
23966-1
Polyethylenimine, Linear,MW 25000,Transfection Grade (PEI 25K)
化學(xué)性質(zhì)：
CASNO. | 9002-98-6,26913-06-4 |
分子式 | (CH2CH2NH)n |
分子量 | 25,000 |
熔點(diǎn) | 73-75º |
溶解度 | SolubleIn: hotwater,coldwateratlowpH,methanol,andethanol. InsolubleIn: benzene,ethyletherandacetone |
Appearance | Whitetoyellowsolid |
24765-1（更高效的PEI聚乙烯亞胺聚合物轉(zhuǎn)染試劑）
PEI MAX-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW40,000)
基本描述：
PolyethylenimineHClMAX,Linear,Mw40,000（PEI40,000）是熱賣(mài)產(chǎn)品線性化聚乙烯亞胺PEI25,000的升級(jí)產(chǎn)品，不同之處在于1）*水解（去乙酰化）；2）PEI25，000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；3）含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺（ethyleneimine）片段，其質(zhì)子化氮水平比PEI25，000提高11%以上。本品經(jīng)堿中和后，可轉(zhuǎn)化為線性化自由胺（PEI），此時(shí)分子量正相當(dāng)于25,000。
ThomasM，etal（2005）研究數(shù)據(jù)表明，去乙酰化的PEI40,000（PolyethylenimineMAX40,000）體外質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率提高21倍，小鼠體內(nèi)靶向效率達(dá)到10,000倍，隨之肺部特異療效顯示增強(qiáng)1500倍。
化學(xué)性質(zhì)：
CASNO. | 9002-98-6,26913-06-4 |
MolecularWeight | 40,000（~22,000freebase） |
Solubility | SolubleIn: Coldandroomtemperaturewater InsolubleIn: Commonorganicsolvents(ethanol,acetone,tetrahydrofuran) |
Appearance | Whitetooff-whitefreeflowingsolid |
使用方法（僅供參考）
1. Pour ~450 mL of Milli-Q H2O into a 500-mL glass beaker.
2. Add 500 mg of PEI to the beaker with stirring.
3. Add concentrated HCl drop-wise to the solution to pH <2.0.
4. Stir until the PEI is dissolved (~2-3 h). Maintain the pH <2.0 throughout.
Approximately 800 μL of 12 M HCl will be required for full PEI dissolution. There may still be some small fiber particles that will not dissolve.
5. Add concentrated NaOH drop-wise to the solution to pH 7.0.
Approximately 500 μL of 10 M NaOH will be required to neutralize the PEI solution.
6. Pour the solution into a 500-mL glass cylinder. Adjust the final volume to 500 mL with Milli-Q H2O.
7. Filter-sterilize the solution through a 0.22-μm membrane.
8. Store aliquots of the desired volume at -20°C.