1．使用分光光度計前，使用者應該先了解本分光光度計的結構和工作原理。以及各個操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應該對分光光度計的安全性進行檢查，電源線接線應牢固。通地要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再接通電源開關。 分光光度計在使用前先檢查一下，放大器暗盒的硅膠干燥筒（在分光光度計的左側），如受潮變色，應更換干燥的藍色硅膠或者倒出原硅膠，烘干后再用。
2．將靈敏度旋鈕調置“1”檔（放大倍率小）。
3．開啟電源，指示燈亮，選擇開關置于“T”，波長調測試用波長。分光光度計預熱20分鐘。
4．打開試樣室蓋（光門自動關閉），調節“0”旋鈕，使數字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調節透過率“”旋鈕，使數字顯示為“100.0”。
5．如果顯示不到“100.0”，則可適當增加微電流放大器的倍率檔數，但盡可能置低倍率檔使用，這樣分光光度計將有更高的穩定性。但改變倍率后必須按（4）重新校正“0”和“”。
6．預熱后，按（4）連續幾次調整“0”和“”，分光光度計即可進行測定工作。
7．吸光度A的測量按（4）調整分光光度計的“00.0”和“”，將選擇開關置于“A”，調節吸光度調零旋鈕，使得數字顯示為“.000”，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。
8．濃度C的測量：選擇開關由“A”旋置“C”，將已標定濃度的樣品放入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示為標定值，將被測樣品放入光路，即可讀出被測樣品的濃度值。
9．如果大幅度改變測試波長時，在調整“0”和“”后稍等片刻，（因光能量變化急劇，光電管受光后響應緩慢，需一段光響應平衡時間），當穩定后，重新調整“0”和“”即可工作。 吸收池（即比色杯）使用注意事項：
① 要*清洗，尤其是盛過蛋白質等溶液，干后形成一層膜，不易洗去，通常杯子不用時可放在
1％洗潔凈液中浸泡，去污效果好，使用時用水沖洗干凈，要求杯壁不掛水珠，還可以用綢布絲線或軟塑料制作一個小刷子清洗杯子。
② 嚴禁用手指觸摸透光面，因指紋不易洗凈。嚴禁用硬紙和布擦拭透光面，只能使用鏡頭紙和綢布。
③ 嚴禁加熱烘烤。急用干的杯子時，可用酒精蕩洗后用冷風吹干。決不可用超聲波清洗器清洗。
④ 吸收池的校正：要固定參比杯和樣品杯，可在杯的毛玻璃面上寫上記號。用盛有參比液的參比杯和樣品杯測定吸光度“A0”，樣品杯換上樣品液后測定的吸光度為“A1”，則校正后的實際吸光度A為：A=A1－A0
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