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THP-1 人單核細胞白血病細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。
 
細胞特性
1） 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞
2） 形態(tài)：單核細胞，懸浮
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

 THP-1 人單核細胞白血病細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 貼壁細胞：將T25瓶中的細胞培養(yǎng)基離心后，去上清，添加6ml*培養(yǎng)基，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
      懸浮細胞：2-3小時
4) 如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.
 
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備RPMI-1640培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(invitrogen 21985) 0.05mM；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：*培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗復蘇存活率約50%，復蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復生長）
 
4） a) 該細胞為懸浮細胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代。同時，您在收到細胞后，請不要通過離心的方式收集細胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。
b) 細胞對血清質量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口*優(yōu)質血清進行培養(yǎng)。
c) 該細胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養(yǎng)級別，可參考細胞說明書中的品牌、貨號），若不添加，可能會對細胞狀態(tài)造成影響。
d) 該細胞對細胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說明書）。
e) 該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 參考傳代周期：傳代時控制細胞密度在20萬-40萬活細胞 / mL，并在細胞生長至80萬-100萬 cell / mL時進行傳代
3） 參考傳代比例：傳代時控制細胞密度在20萬-40萬活細胞 / mL，并在細胞生長至80萬-100萬 cell / mL時進行傳代。
4） 參考換液頻率：傳代時換液
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；  

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量.每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少4個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

        一、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二、細胞系服務：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
               細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yǎng)技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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