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毛細(xì)管電泳的概述
毛細(xì)管電泳基本原理
毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis，CE)是八十年代后期在范圍內(nèi)迅速崛起的一種分離分析技術(shù)。具有快速、高效、高靈敏度、易定量、重現(xiàn)性好及自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛地應(yīng)用于小分子、小離子、多肽及蛋白質(zhì)的分離分析研究。它又在核酸分離方面顯示出巨大的潛力。電流通過(guò)導(dǎo)體時(shí)產(chǎn)生焦耳熱。傳統(tǒng)平板凝膠電泳的*大局限性在于其無(wú)法克服兩端高電壓帶來(lái)的焦耳熱所產(chǎn)生的負(fù)面影響。焦耳熱可使篩分介質(zhì)內(nèi)部出現(xiàn)溫度、粘度及分離速度的不均一，影響遷移、降低效率、使區(qū)帶變寬。由于這種負(fù)面影響與電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，所以極大地限制了高電壓的引入。也難以提高電泳速度。毛細(xì)管電泳使樣品在一根極細(xì)的柱子中進(jìn)行分離。細(xì)柱可減小電流，使焦耳熱的產(chǎn)生減少;同時(shí)又增大了散熱面積，提高散熱效率，大大降低了管中心與管壁間的溫差，減少了柱子徑向上的各種梯度差，保證了高效分離。因此可以加大電場(chǎng)強(qiáng)度，達(dá)到100～200V/cm，全面提高分離質(zhì)量。
毛細(xì)管電泳的基本裝置是一根充滿(mǎn)電泳緩沖液的毛細(xì)管和與毛細(xì)管兩端相連的兩個(gè)小瓶微量樣品從毛細(xì)管的一端通過(guò)“壓力”或“電遷移”進(jìn)入毛細(xì)管。電泳時(shí)，與高壓電源連接的兩個(gè)電極分別浸人毛細(xì)管兩端小瓶的緩沖液中。樣品朝與自身所帶電荷極性相反的電極方向泳動(dòng)。各組分因其分子大小、所帶電荷數(shù)、等電點(diǎn)等性質(zhì)的不同而遷移速率不同，依次移動(dòng)至毛細(xì)管輸出端附近的光檢測(cè)器，檢測(cè)、記錄吸光度，并在屏幕上以遷移時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)將各組分以吸收峰的形式動(dòng)態(tài)直觀地記錄下來(lái)。
毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛細(xì)管電泳(HPCE), 是近年來(lái)發(fā)展非常快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm內(nèi)徑毛細(xì)管柱內(nèi)用高電壓進(jìn)行分離, 創(chuàng)立了現(xiàn)代毛細(xì)管電泳。1984年Terabe等建立了膠束毛細(xì)管電動(dòng)力學(xué)色譜。1987年Hjerten 建立了毛細(xì)管等電聚焦,Cohen和Karger提出了毛細(xì)管凝膠電泳。短短幾年內(nèi),由于CE符合了以生物工程為代表的生命科學(xué)各領(lǐng)域中對(duì)多肽、蛋白質(zhì)(包括酶，抗體)、核苷酸乃至脫氧核糖核酸(DNA)的分離分析要求,得到了迅速的發(fā)展。