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如何判斷TrypLE Express酶的消化效果?

時間:2025-6-25閱讀:82
判斷 TrypLE Express 酶的消化效果,可從細胞形態、細胞活力、細胞回收率等多個維度進行綜合評估,以確保細胞后續實驗的順利開展。


  1. 顯微鏡下觀察細胞形態:在酶消化過程中及終止消化后,將培養皿置于倒置顯微鏡下觀察,是判斷消化效果最直觀的方法。若細胞貼壁緊密時,呈多邊形或不規則形狀,相互連接成片。隨著消化進行,理想的消化效果表現為細胞逐漸變圓,從培養皿表面松動,部分細胞開始懸浮。若細胞過度消化,會出現細胞膜破裂、細胞碎片增多的現象;若消化不足,則細胞仍大量貼壁,僅有少量細胞變圓。通過觀察細胞形態變化,可及時判斷消化程度,并調整消化時間 。例如,觀察 HeLa 細胞消化情況時,當約 80% - 90% 的細胞變圓,且輕輕晃動培養皿有細胞開始脫離時,說明消化效果較好;若大部分細胞仍緊密貼壁,表明消化時間不足;若視野中出現大量破碎的細胞殘片,則意味著過度消化。

  2. 檢測細胞活力:細胞活力是衡量消化效果的關鍵指標,直接關系到后續實驗的成敗。常用的檢測方法如臺盼藍染色法,活細胞由于細胞膜完整,能排斥臺盼藍而不被染色,死細胞則因細胞膜通透性增加,被染成藍色。通過計數染色細胞與未染色細胞的比例,可計算細胞活力。正常情況下,經 TrypLE Express 酶合理消化后的細胞,活力應保持在 90% 以上。此外,還可采用 CCK - 8、MTT 等方法檢測細胞代謝活性,間接反映細胞活力。若消化過程對細胞造成較大損傷,細胞活力會顯著下降,影響后續細胞培養、增殖、分化等實驗 。

  3. 評估細胞回收率:細胞回收率反映了消化過程中細胞的損失程度。在消化完成后,收集所有細胞懸液,通過細胞計數(如使用血細胞計數板或自動細胞計數儀)計算回收的細胞數量,并與消化前的細胞數量對比,得出細胞回收率。一般來說,較高的細胞回收率意味著消化過程對細胞的損傷較小,消化效果良好。若細胞回收率過低,可能是消化時間過長、酶濃度過高導致細胞損傷,或是消化不充分,部分細胞未能從培養表面有效解離 。

  4. 觀察細胞再貼壁及生長情況:將消化后的細胞接種到新的培養器皿中,觀察細胞的再貼壁及后續生長情況,也是判斷消化效果的重要依據。消化效果好的細胞,在接種后 2 - 4 小時內開始貼壁,24 小時后細胞基本貼壁,并呈現出正常的生長形態,開始增殖。若細胞貼壁緩慢,或貼壁后形態異常、生長緩慢,甚至出現大量死亡,說明消化過程可能對細胞造成了不良影響,導致細胞功能受損,影響其正常的生長和增殖能力 。

  5. 分析細胞表面標志物表達:對于一些對細胞表面標志物要求較高的實驗,如細胞分選、免疫細胞研究等,可通過流式細胞術檢測細胞表面標志物的表達情況來判斷消化效果。TrypLE Express 酶若消化過度,可能會破壞細胞表面抗原決定簇,導致標志物表達降低或丟失。通過對比消化前后細胞表面標志物的表達水平,若標志物表達無明顯變化,表明消化過程未對細胞表面結構造成嚴重破壞,消化效果良好;反之,則說明消化條件可能需要優化 。



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