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上海易匯生物科技有限公司

科研小白入門(mén):快速了解無(wú)縫克隆試劑盒

時(shí)間:2025-7-23閱讀:69
在基因研究中,無(wú)縫克隆試劑盒是將特定基因片段準(zhǔn)確連接到載體上的得力工具。對(duì)于科研小白,它的操作雖不復(fù)雜,但了解其原理和步驟很關(guān)鍵。
無(wú)縫克隆基于同源重組原理。通過(guò)特殊引物給目的基因兩端加上與線性化載體末端互補(bǔ)的 “特殊標(biāo)簽",再利用試劑盒里的重組酶,將二者精準(zhǔn)連接,避免了傳統(tǒng)克隆中限制性?xún)?nèi)切酶的復(fù)雜操作 。
使用時(shí),先設(shè)計(jì)引物,用 PCR 擴(kuò)增出帶 “特殊標(biāo)簽" 的目的基因片段,并純化。同時(shí),根據(jù)載體特點(diǎn),選擇酶切或 PCR 擴(kuò)增的方式將其線性化并純化 。之后,按說(shuō)明書(shū)將目的基因片段、線性化載體與試劑盒中的重組酶混合液、反應(yīng)緩沖液配成反應(yīng)體系,50℃孵育 30 分鐘 - 1 小時(shí),完成連接 。接著把連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)培養(yǎng)篩選出陽(yáng)性克隆,最后通過(guò)菌落 PCR、DNA 測(cè)序等驗(yàn)證克隆是否成功 。
無(wú)縫克隆試劑盒優(yōu)勢(shì)明顯,克隆效率高,連接精準(zhǔn),能保留基因原始序列;適用多種載體和基因片段;操作簡(jiǎn)單,無(wú)需復(fù)雜設(shè)備和技術(shù),大大降低實(shí)驗(yàn)門(mén)檻,助力科研小白快速開(kāi)啟基因研究之旅。



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