彗星檢測(cè)試劑盒（3孔載玻片）是一種單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)（SCGE），用于檢測(cè)細(xì)胞中DNA損傷的快速靈敏測(cè)試。其原理是，在器官或組織遭受（如輻射、重金屬等）后，細(xì)胞中的單鏈或雙鏈DNA斷裂，將細(xì)胞與融化的瓊脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破壞細(xì)胞膜，用堿性溶液解開(kāi)DNA。最后，對(duì)樣品進(jìn)行電泳，在電場(chǎng)的作用下，正常細(xì)胞的大分子DNA遷移較短的距離，完整的DNA保留在細(xì)胞核的范圍內(nèi)，DNA碎片從細(xì)胞核中遷移出來(lái)，用PI染料染色，在熒光顯微鏡下觀察，完整的脫氧核糖核酸形成圓形或微辮狀；DNA碎片形成彗星狀圖案。根據(jù)電泳緩沖液的pH值，可分為中性彗星試驗(yàn)（pH=8.4）和堿性彗星試驗(yàn)（pH>13）。中性彗星法主要用于檢測(cè)DNA雙鏈斷裂損傷，堿性彗星法具有較高的靈敏度，可用于檢測(cè)較少的單鏈和雙鏈斷裂損害。

艾美捷彗星法DNA損傷分析試劑盒：

目錄號(hào)：D-AKE3040

尺寸：15T

儲(chǔ)存：在4°C下儲(chǔ)存6個(gè)月，避光

彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）:

套件組件尺寸（15T）儲(chǔ)存條件

彗星載玻片（3孔）5 4℃

10×賴(lài)氨酸溶液15 mL 4℃

EDTA（500 mM）25 mL 4℃

瓊脂（低熔點(diǎn)）15 mL 4℃

碘化丙啶（PI）（50x）20μL 4℃，避光

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）15 mL 4℃

彗星法DNA損傷分析試劑盒試劑準(zhǔn)備：

彗星幻燈片（3孔）：隨附隨用。使用前將其平衡至室溫。在4℃下儲(chǔ)存。10×賴(lài)氨酸溶液：供應(yīng)即用。使用前將其平衡至室溫。在4℃下儲(chǔ)存。EDTA（500mM）：供應(yīng)時(shí)即用。使用前將其平衡至室溫。儲(chǔ)存溫度為4℃。

瓊脂（低熔點(diǎn)）：將瓊脂（低沸點(diǎn)）瓶在90-95°C的水浴中加熱20min，直到瓊脂液化。將瓶子轉(zhuǎn)移到37°C水浴中20分鐘以保持液態(tài)。將其余部分等分并在4℃下儲(chǔ)存。

碘化丙啶（PI）（50×）：使用前新鮮制備，用PBS稀釋50倍至1×PI染料濃度，在4°C下儲(chǔ)存并避光。

40 mM Tris-HCl（pH 7.5）：在使用前制備，用PBS稀釋100倍至0.4 mM Tris-HCl（pH7.5）的濃度，并在4°C下儲(chǔ)存。

1×裂解緩沖液：制備100 mL 1×裂解液

可以使用以下方法之一測(cè)量尾力矩：

（a） 橄欖尾力矩=尾DNA%×尾力矩長(zhǎng)度（從頭部中心到尾部中心測(cè)量，見(jiàn)圖1）

（b） Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length（見(jiàn)圖1）彗星測(cè)定結(jié)果分析軟件可通過(guò)Opencomet、CASPlab和彗星測(cè)定IV（PerceptiveInstruments）等獲得。

圖1：彗星試驗(yàn)中的DNA損傷。

圖2：定性方法：DNA損傷按尾DNA%的比例分為五級(jí)

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。