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多酚氧化酶（PPO）的分離提取
閱讀：945 發布時間：2018-8-7一、原理與目的
多酚氧化酶是植物組織內廣泛存在的一種含銅氧化酶，植物受到機械損傷和病菌侵染后，PPO催化酚與O2氧化形成醌，是組織形成褐變，以便損傷恢復，防止或減少感染，提高抗病能力。醌類物質對微生物有毒害作用，所以傷口醌類物質出現是植物防止傷口感染的愈傷反應，因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多酚氧化酶也可與細胞內其他底物氧化相偶聯，起到末端氧化酶的作用。
PPO的存在是水果、蔬菜褐變及營養喪失的主要原因之一。PPO氧化內源的酚類物質生成鄰醌，鄰醌再相互聚合成醌或蛋白質、氨基酸等作用生成高分子絡合物而導致褐色素的生成，色素分子量愈高，顏色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是馬鈴薯解除休眠的指標之一。
本實驗將采用馬鈴薯為主要材料，通過組織細胞破碎勻漿、過濾、離心、硫酸銨沉淀、透析等步驟獲得PPO的粗酶液。
通過本項實驗，學習和了解蛋白質的提取、分離的基本原理和方法，掌握相關儀器設備的操作使用，以及蛋白質的提取、分離的系統技術。
二、材料與試劑
（1）馬鈴薯（大約每小組100-200g）
（2）試劑：
0.03M磷酸緩沖液PH6.0(內含0.02M巰基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制時配×10倍的濃縮液1000ml；固體硫酸銨；0.03M磷酸緩沖液PH6.0（內含0.02M巰基乙醇，0.001MEDTA，0.005MgCL2）配置時配
（3）實驗器械與儀器設備：
試管與試管架；燒杯、玻璃攪棒；移液管、滴管等；試劑瓶；透析袋；
過濾紗布；植物組織勻漿器；pH計和pH試紙；GL-20C高速冷凍離心機；
DL-7A大容量低速冷凍離心機
三、操作步驟
1：粗酶提取：
水果肉組織按1：1（W/V）比例與003M磷酸緩沖液PH6.0（內含0.02M巰基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，勻漿4層后紗布過濾，濾液以6000rpm離心10min，棄除沉淀獲得酶提取液。
2：鹽析分級沉淀：
在酶提取液中加入固體硫酸銨使其達到40%飽和度（邊加邊攪拌達到充分溶解），然后6000rpm離心20min棄除沉淀；離心上清液在加入固體硫酸銨達到70%飽和度（邊加邊攪拌達到充分溶解），再以6000rpm離心20min，棄除上清夜，收集粗酶沉淀。
四、實驗結果
獲得PPO粗酶液。