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技術文章

如何學會分離培養人的成纖維細胞?

閱讀:514          發布時間:2018-9-20
成纖維細胞(又稱皮膚成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質細胞。細胞來源于人正常的皮膚組織,成纖維細胞是一種貼壁培養方式的細胞,由于這些細胞非常容易培養,它們已經被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。
一般而言,成纖維細胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細胞外基質,并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。
傷口修復時,成纖維細胞由可增殖,可遷移的表型變為有收縮性的,可重塑基質的表型,同時,它們會分泌大量的透明質酸來應對修復時的炎癥反應。

以下是賽百慷提供的一種人成纖維細胞的制備方式(僅供參考):
  1. 首先在分離成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行,打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。
  2. 將手術廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精,消毒 2min,
  3. 將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍,
  4. 然后用眼科剪除去脂肪及結締組織等,
  5. 將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊,放入 dish 中,加 0.1% 的 dispase 溶液,封口膜封口,4℃ 冰箱過夜消化,
  6. 第二天,用鑷子將表皮與分開(薄的那層是表皮,厚的那層是),
  7. 將剪碎,移至離心管,用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h(視消化程度而定),
  8. 用 100 μm 網篩過濾,
  9. 取濾液,300 g,離心5 min,
  10. 用*培養基重懸沉淀,
  11. 鋪瓶,
  12. 隔天換液。
以上是皮膚成纖維細胞分離培養的一種方式,不同的技術人員分離培養的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測,采用細胞免疫熒光技術。細胞純度可高達于 90%,所有的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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