化工儀器網
技術文章
EA.hy926人臍靜脈融合細胞
閱讀：540 發布時間：2018-12-20培養操作及注意事項說明
一．產品簡介
1、細胞名稱：EA.hy926人臍靜脈融合細胞
EA.hy926人臍靜脈融合細胞描述 :在PEG脅迫下，將原代培養的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合，構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養基上生長并以八因子相關抗原篩選。 EA.hy926已經過100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示Weibel-Palade小體的細胞質分布以及組織特異性的細胞器，分化的內皮細胞特性如血管生成，體內平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應。
- 生長特性：成纖維細胞
- 組織來源：組織： 體細胞融合子
- 細胞形態：內皮細胞
3、細胞生長條件：
培養條件 | 90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S |
溫度 | 37℃ |
空氣條件 | 5% CO2,100% AIR |
傳代方法 | 1:2傳代，2~3天換液 |
凍存條件 | 90%FBS+10%DMSO |
二．使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。