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技術文章

細胞膜流動性測定實驗

閱讀:1755          發布時間:2019-2-15

膜結構中的蛋白質和脂質具有相對側向流動性;細胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌、貫穿在其中及吸附在其表面的蛋白質組成的,磷脂雙分子層疏水的尾部在內,親水頭部在外。
實驗方法原理    常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后,介質粘度增加,順反異構受到抑制,成為能發光的全反構型。
實驗材料    腫瘤細胞
試劑、試劑盒    磷酸鹽緩沖液DPH
儀器、耗材    熒光分光光度計離心機
實驗步驟    
1.  取對數生長期的腫瘤細胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次。

2.  取107個細胞,離心,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。

3.  25℃振蕩溫育30 min,再以PBS洗滌1次。

4.  懸浮于4 ml PBS溶液中。

5.  測定儀器為熒光分光光度計,在激發波長362 nm,發射波長432 nm,狹縫10條件下測定熒光強度。
注意事項    
由于DPH可進入細胞內部,后來又合成了其陽性離子衍生物1-(4-三苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透過細胞膜進入細胞,因此,理論上TMDPH標記法較DPH標記法更能準確的反映膜脂流動性。

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