化工儀器網
技術文章
人胚胎干細胞H9無飼養層培養方法
閱讀：1061 發布時間：2019-2-28人胚胎干細胞H9無飼養層培養方法
使用說明書
細胞名稱 H9 Feeder Free 人胚胎干細胞H9 無飼養層
貨號 0692
種屬 人
組織來源 人胚胎內細胞團
形態 球形克隆
生長方式 貼壁
安全性 所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護
培養 *培養液： mTeSR1 人ES/iPS 細胞無飼養層*培養試劑盒（Stem cell, 貨號
85850）
傳代消化液：溫和分離細胞試劑（Stem cell, 貨號07174）
凍存液：無血清無動物成分細胞凍存液（Stem cell, 貨號07930）
基質膠：hES 基質膠（BD，貨號354277）
溫度：37℃
溫度：37℃ 氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代 收到細胞后，請對細胞培養瓶外表進行消毒，將細胞置于培養箱中進行 1-2 小時的緩
沖，待細胞恢復基本生長狀態后，進行后續細胞實驗。
在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：人胚胎干細胞H9無飼養層培養方法
（一）細胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內，嚴格無
菌操作，打開細胞培養瓶，若培養瓶上無特殊標注，吸去剩余培養液，只留 6-8ml培
養液繼續培養。
（二）細胞已長滿（達 85-95%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
1.棄去培養液，用 PBS 洗滌 1-2 次，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞回縮變圓、
透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入雙倍的含 10%血清的*培
養液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液，
3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細胞彈散，
4.加入新鮮培養液重懸細胞，進行傳代、凍存，
5.如果沒有特別說明，建議收到細胞后的次傳代比例為 1:2。
注：1.觀察細胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀
察細胞形態請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2.瓶中運輸的培養液不能重復使用，請換新鮮培養液培養；
3.有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內；
4.收到細胞后，若發現培養瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們聯系。
保存 凍存條件：70%基礎培養液+20%胎牛血清+10%DMSO
保存條件：液氮存儲
供應限制 僅供研究之用
常見問題 1.培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師
解決方案 解決。
人胚胎干細胞H9無飼養層培養方法
?