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實(shí)驗(yàn)方法原理    根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。
儀器、耗材    光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡熒光顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡透射電子顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

1.  未染色細(xì)胞

凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見(jiàn)凋亡小體。
貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
 
2.  染色細(xì)胞

常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
 
二、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
 
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來(lái)評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。
 
常用的DNA 特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst33258), DAPI。三種染料與 DNA 的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在DNA 的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。
 
Hoechst 是與DNA 特異結(jié)合的活性染料，儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使用時(shí)用PBS 稀釋成終濃度為2~5 mg/ml。
 
DAPI 為半通透性，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1 mg/ml的濃度，使用終濃度一般為0.5 ~1 mg/ml。
 
結(jié)果評(píng)判：細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb 期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。
 
三、透射電子顯微鏡觀(guān)察
 
結(jié)果評(píng)判：凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosisnuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤(pán)繞，出現(xiàn)許多稱(chēng)為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)；Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。