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4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理
閱讀：4763 發布時間：2020-8-31標本中大多數神經激素、肽類物質,以及蛋白質為水溶性，在用于研究之前，常需固定, 即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質的氨基反應，使蛋白質凝固，因此在醫藥上可做為檢驗時的組織固定劑、以及防腐劑等。在固定劑中，用的是多聚甲醛。
常用固定液：固定劑品種很多，但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同，各有優缺點。
醛類（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）
醇類（常用乙醇）
其它 （丙酮）
(1) 醛類
甲醛（福爾馬林）應用廣
原理：形成分子間的交聯，影響蛋白構型而使之固定。 優點：形態結構保存好，且穿透性強，組織收縮少。 缺點：
甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色；
醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙；
分子間交聯形成的網格結構可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結果。 注意事項：
縮短固定時間，降低固定溫度(4°C)，為此組織塊不宜過厚。
改用中性緩沖福爾馬林，以pH值7.2～7.4 0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液配制成10％甲醛固定液，減少固定液pH的變化。
固定后充分水洗以減少分子間交聯。
切片在作免疫組化染色前，先經預處理使抗原再現(抗原修復)。
戊二醛：
穿透性強，微細結構保存好，但對抗原有一定影響，常與其他固定劑聯合用作免疫電鏡固定液。
多聚甲醛(常用4%)：
可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色。
主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原，例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。
(2) 醇類
用的醇類固定劑是乙醇。
其固定作用：使細胞內蛋白、糖類發生沉淀。 優點：穿透性強、抗原性保存好。 缺點：
脫水性強，易引起組織收縮、變硬，影響切片質量，因而乙醇固定時間不宜過長(2h內)。 乙醇使蛋白變性的作用輕，固定后可再溶解；染色過程中，溫育時間長，抗原可流失而減弱反應強度
3) 其它固定劑 丙酮：
對抗原性的保存好，但脫水性更強，較少用于組織標本，但細胞爬片常用丙酮固定。