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谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）測試盒
閱讀：480 發(fā)布時間：2020-11-11
谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性測定試劑盒說明書
微量法 100 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
GOT（ 2.6.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化可逆轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，是
氨基酸代謝的重要酶。此外，GOT 在心肌細(xì)胞中含量高，臨床上一般常作為心肌梗塞和
心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時其血清濃度也可升高。
測定原理
GOT 催化 α-同戊二酸和天門冬氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸進
一步自行脫羧生成丙酮酸；丙酮酸可與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成 2,4-二硝基苯腙，在堿性條
件下顯棕紅色；測定 505nm 吸光度的變化，即可計算 GOT 酶活力。
需自備的儀器和用品
可見分光光計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研
缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑三：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存；
樣品測定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提
取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；
8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定操作表
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 505nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱（μL） 測定管 對照管
待測樣本 10
試劑一 25 25
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）預(yù)熱 30min
試劑二 25 25
待測樣本 10
混勻后，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng) 20min
試劑三 240 240
混勻，室溫（25℃）放置 10min，在 505nm 波長處測各管吸光度。每個測定管需設(shè)一個
對照管。
計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、以相對吸光值（A 測定管-A 對照管）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)酶活力單位（U/L）為縱坐標(biāo)。作
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GOT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
3、微生物、細(xì)胞或組織中 GOT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測
勻漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、以相對吸光值（A 測定管-A 對照管）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)酶活力單位（U/L）為縱坐標(biāo)。作
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.964
2、血清中 GOT 活力(U/L)= 0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測定管-A 對照管。
3、微生物、細(xì)胞或組織中 GOT 活力(U/g 蛋白)=0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測
勻漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測定管-A 對照管。