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總膽固醇含量測定試劑盒說明書
閱讀：396 發布時間：2020-11-30貨號: 規格：50管/48樣
總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測定試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
產品內容：
試劑一：異丙醇50mL（自備）。
TC 工作液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
TC 標準品：液體1mL×1 支，5μmol/mL，4℃保存。
產品說明：
TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉化為FC；進一步利用膽固醇氧化酶催化FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與TC 含量成正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
操作步驟:
一、TC的提取：
1、 組織中TC的提取：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即TC待測液。
2、 細胞、細菌中TC的提取：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），8000g 4℃離心10min，取上清，即TC 待測液。
3、 血清（漿）等樣品：直接測定。
二、測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到500 nm，蒸餾水調零。
2. TC 工作液置于37℃水浴30min。
3. 標準管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 標準品和980μLTC 工作液，迅速混勻，5min 后于500nm 處比色，記為A 標準管。
4. 測定管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 待測液和980μLTC 工作液，迅速混勻，5min 后于500nm 處比色，記為A 測定管。
注意：標準管只需測定一次。血鈣濃度計算：
三、計算公式：
1. 血清（漿）中TC 含量：
TC（μ mol /dL）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管×100 mL
= 500×A 測定管÷A 標準管
C 標準液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 組織中TC 含量：
(1)按樣本蛋白濃度計算
TC（μ mol/mg prot）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷Cpr
= 5×A 測定管÷A 標準管÷Cpr
(2)按樣本質量計算
TC（μ mol / g）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷W
= 5×A 測定管÷A 標準管÷W
C 標準液：5μmol/mL；樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g/mL
3. 細胞、細菌中TC 含量：
TC（μ mol /104 cell）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞（104 cell /L）
= 5×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞（104 cell /L）
C 標準液：5μmol/mL。
注意事項：
。低檢出限為1mmol/L。