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上海雅吉生物科技有限公司>技術文章>葉綠素的理化性質測定實驗

技術文章

葉綠素的理化性質測定實驗

閱讀:1117          發布時間:2020-12-23

實驗方法原理 葉綠素是一種二羧酸的酯,可與堿起皂化作用,產生的鹽能溶于水,可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素與類胡蘿卜素都具有共軛雙鍵,在可見光區表現出一定的吸收光譜,可用分光鏡檢查或用分光光度計精,確測定。葉綠素吸收光量子后轉變成的激發態葉綠素分子很不穩定,當它回到基態時,可以發出紅光量子,因而產生熒光。葉綠素的化學性質也很不穩定,容易受強光的破壞,特別是當葉綠素與蛋白質分離后,破壞更快。葉綠素分子中的鎂可被H+所取代而成為褐色的去鎂葉綠素,后者遇到Cu2+可形成綠色的銅代葉綠素,這種葉綠素在光下不易受到破壞,故常用此法制作綠色多汁植物的浸制標本。

實驗材料

菠菜葉 木瓜葉

試劑、試劑盒

95﹪酒精 KOH甲醇溶液 醋酸 苯 醋酸銅粉 碳酸鈣 石英砂

儀器、耗材

天平 分光鏡 小電爐 試管 量筒 移液管 研缽 小燒杯 漏斗等

實驗步驟 1. 葉綠體色素提取

 

稱取新鮮葉片2g剪碎于研缽中,加少量95﹪酒精(或80﹪丙酮)和少量CaCO3粉及石英砂,研磨成勻漿,再加95﹪酒精(或80﹪丙酮)l0ml稀釋研磨后,用濾紙過濾于小瓶中,濾液即為葉綠體色素提取液。

 

2. 葉綠素的皂化作用(綠色素與黃色素的分離)

 

(1) 用移液管吸取葉綠體色素提取液約5ml放入試管中,再加入1.5ml左右20﹪KOH甲醇溶液,充分搖勻。

 

(2) 片刻后,加入5ml苯,搖勻,再沿試管壁慢慢加入1~1.5ml蒸餾水,輕輕混勻(勿激烈搖蕩),靜置試管架上,可看到溶液逐漸分為兩層,下層是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化葉綠素a和b(以及少量葉黃素),上層是苯溶液,其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。

 

3. H+和Cu2+對葉綠素分子中Mg2+的取代作用

 

(1) 吸取葉綠體色素提取液約5ml放入試管中,加入30﹪醋酸數滴,搖勻,觀察溶液顏色的變化。

 

(2)當溶液變褐色后,傾出一半于另一試管中,投入幾粒醋酸銅粉,微微加熱,觀察溶液顏色變化,與未加醋酸銅的一管相比較。

 

(2)解釋上述顏色變化過程,并列出其反應式。

 

4. 葉綠素的熒光現象

 

取比較濃的葉綠素提取液5ml放入試管中,在直射光下觀察溶液的透射光及反射光

 

的顏色有何不同?試述其原因。

 

5. 光對葉綠素的破壞作用

 

(1)取兩支試管,各加入經稀釋的葉綠體色素提取液5ml,一管放在直射光下,另一管放在黑暗處,1~2 h后觀察二管溶液顏色有何變化。

 

(2) 另取上述實驗Ⅰ中用紙層析法分離成的色譜兩張,一張放在直射光下,另一張放在黑暗中。約1 h以后比較兩張色譜上四種色素的顏色各有何變化。

 

(3) 解釋以上結果。

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