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谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法
閱讀：619 發布時間：2022-2-18谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法
分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
谷氨酰胺（Glutamine）是構成人體蛋白質所必需的20種氨基酸之一。是人體內普遍的、不可缺乏的條件性必需氨基酸，是構成蛋白質*的氨基酸之一，更是某些細胞培養中最基本的元素。由于谷氨酰胺不穩定的特性，在細胞培養基的整合中，易自發性分解為谷氨酸和氨離子，而氨離子對細胞的毒性很強，因此，在細胞培養體系中，須密切關注谷氨酰胺的儲存壽命（SHELF LIFE）和實時監測。
測定原理：
在谷氨酰胺酶（Glutaminase）作用下，谷氨酰胺發生脫氨基反應，產生谷氨酸（glutamic acid）和氨離子；
谷氨酰胺+H2O———————谷氨酸+NH4+
然后用顯色劑進行顯色，顯色后在570nm下進行測定。
谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×2瓶，4℃保存；
試劑二：液體1.5ml×1瓶，-20℃保存；
試劑三，粉劑×1瓶， 4℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍 4℃保存
谷氨酰胺提取：
1、細菌或培養細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）或細胞培養液樣品：按照血清（漿）或細胞培養液體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）或者細胞培養液加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法
測定步驟
分光光度計預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。
在有蓋EP管中加入下列試劑：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管1 | 對照管2 |
| 樣本 | 1000 | 1000 | |
| 試劑一 | 1000 | ||
| 試劑二 | 10 | 10 | 10 |
混勻，37℃水浴30min（蓋緊，以防止水分散失），
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管1 | 對照管2 |
| 試劑三 | 200 | 200 | 200 |
90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于570nm波長處比色，
△A=A測定管 - A對照管1 - A對照管2。對照管2只要做一管。
谷氨酰胺含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x為谷氨酰胺含量（µg/mL），y為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細胞培養液體積計算
谷氨酰胺含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計算
谷氨酰胺含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質量計算
谷氨酰胺含量(µg/g鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
谷氨酰胺含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1：加入反應體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）或細胞培養液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1000：細菌或細胞總數，1000萬。
谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法
注意：
1、該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酰胺含量測定，檢測下限為100µg/mL。
2、標準曲線線性范圍為：100µg/mL -600µg/mL。
3、ΔA線性范圍為：0.01-2；若大于2則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。
谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒分光光度法