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還原型谷胱甘肽（reduced glutathione）試劑盒說明書
閱讀：368 發布時間：2022-8-31還原型谷胱甘肽（reduced glutathione）試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
GSH是細胞內最主要的抗氧化巰基物質，在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此，測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。
測定原理：
DTNB與GSH反應生成復合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione）試劑盒說明書
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
GSH測定操作：
1. 分光光度計預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測定一次。
GSH含量計算公式：
GSH標準曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione）試劑盒說明書
GSH計算：
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr ）=0.667×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
GSH（μ mol/g鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W
（3）按細胞數量計算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量)=0.667×(A2－A1) ÷細胞數量
（4）按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)
V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質量，g ；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；
注意事項：
1. 試劑一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
2. 檢出限為0.01mmol/L。
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione）試劑盒說明書