酵母化學感受態細胞制備試劑盒本酵母化學感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理，高效快速制備釀酒酵母化學感受態細胞，用于長期凍存以備后續轉化的產品，

酵母化學感受態細胞制備試劑盒具有下列特點：
1. 一次制備，-80℃保存，多次使用，免去每次轉化都要制備釀酒酵母感受態
細胞。
2. 操作簡單，單溶液制備，除酵母培養的時間外，整個操作只需要 30 分鐘
3. 主要用于釀酒酵母 S. cerevisiae，也適用于其他多種實驗用酵母菌株，包括
S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris 等。
4. 受體酵母可以不含質粒，也可用于攜帶有選擇性質粒的酵母（如雙雜交體系
中的酵母）。
5. 對釀酒酵母，zui高轉化效率可達到 0.2-1×10
5個轉化子/ug 質粒 DNA。對
其他酵母，效率稍低，范圍在 100-2000 個轉化子/ug 質粒 DNA。
6. 得到的感受態細胞可以用各種線性或環狀酵母穿梭質粒 DNA 進行轉化，例
如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。
7. 可以用于酵母雙雜交、定點突變（Site－Directed Mutagenesis）、基因破
壞（Gene Disruption）、等位突變基因修復（Mutant Allele Recovery）
等實驗。
8. 本產品可以制備 20 只酵母感受態細胞（需要 200mL 酵母培養液），并還帶
高效轉化液。 規格及成分 成 份 編 號 小紙盒包裝
制備液 A 81109A 120 mL
制備液 B 81109B 6 mL
制備液 C 81109C 10 mL
轉化液 A 81109D 30 mL
轉化液 B 81109E 30 mL
使用手冊 81109sc 1 份
自備試劑 YPD 培養基
運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法 一：酵母化學感受態細胞的制備
說明：按本方法制備 1 管酵母化學感受態細胞就需要 OD600 達到 0.6-1.0 的新
鮮酵母培養液 10 mL，用戶需根據所需酵母感受態細胞的數量決定培養細胞的體
積。如果超過 10 mL，則制備液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過 3 周的也可以），接種
到裝在 50mL 離心管中的 10 mL 的自備的 YPD 培養基中。
2. 30℃搖晃培養，搖床速度 250 rpm/分鐘，直到 OD600 達到 0.6-1.0
（相當于 0.6-1×10
7細胞/mL）。
3. 室溫 3000rpm 離心 5 min，棄上清得酵母細胞沉淀。
4. 新鮮制備適量的酵母感受態制備工作液。對 10 mL 酵母需要 5.25 mL
的工作液，其配制方法是：將 4.75 mL 制備液 A、0.25 mL 制備液 B
和0.25 mL制備液C加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。
酵母感受態制備工作液可放室溫待用。
5. 用 0.5 倍體積的新鮮配制的酵母感受態制備工作液洗滌酵母細胞沉淀
一次（對 10 mL 酵母則需要 5 mL 酵母感受態制備工作液）。即混合后
振蕩 1 分鐘，室溫 3000rpm 離心 3 分鐘，去上清得洗滌后的酵母細胞
沉淀。
6. 再用 0.02 倍體積的酵母感受態制備工作液充分重懸菌體（對 10 mL
酵母，則需要 0.2 mL 酵母感受態制備工作液）。
7. 按每管 0.2 mL 分裝到冷凍管中，放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入
-80℃冰箱待用。0.2 mL 的感受態細胞足夠 1 次轉化使用。注意：放
入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降，急凍將使轉化效率降低，這點跟
大腸桿菌感受態制備過程不同。
二：化學轉化酵母感受態細胞
1. 將總體積不超過 20 uL 的 0.1-5 ug 質粒 DNA 加到剛從-80℃冰箱取
出的、還處于凝固狀態的 0.2 mL 酵母感受態細胞上。注意：zui同時
做一個不加質粒 DNA 的陰性對照組。
2. 室溫充分振蕩直到凝固的感受態細胞*融化。注意：此步非常關鍵，
如果能在恒溫振蕩器上 37℃振蕩 5 分鐘，則效果更好。
3. 加入 1.4mL 轉化液 A，輕柔顛倒混勻一分鐘。
4. 30℃培養 1 小時。
5. 室溫 3000g 離心 5 分鐘，棄上清。
6. 在酵母細胞沉淀中加 1.0 mL 轉化液 B，振蕩一分鐘。
7. 室溫 3000g 離心 5 分鐘，棄上清。
8. 在酵母沉淀細胞中加入適量（如 100 uL）的轉化液 B，混勻后在在選
擇培養基上全部涂盤。
9. 30℃培養 3-5 天后即得酵母轉化菌落。

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