NOR-10小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞系從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化

NOR-10小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞系背景資料：

 從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。 MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。 植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細(xì)胞只是產(chǎn)生纖維組織。 這些細(xì)胞系是研究體外成骨細(xì)胞分化的好模型，尤其是ECM信號。 它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細(xì)胞的行為類似。

規(guī)格：5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng)。
細(xì)胞數(shù)量：1× 106個
細(xì)胞傳代：1:4~1:6傳代；每周換液2~3次
細(xì)胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細(xì)胞檢測:細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM（高糖） +10% FBS；37℃，5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細(xì)胞凍存：液氮凍存?????

T25瓶細(xì)胞處理方法

收到NOR-10小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞系后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基（含1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

②若細(xì)胞密度較大，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時請在拍照后將懸浮的細(xì)胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。（這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題，請當(dāng)天反饋并提供圖片，且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋，細(xì)胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費售后。