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產品簡介
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒DNA 只存在于細胞核內，因此參與轉錄調節(jié)和 DNA 復制的蛋白質主要存在于細胞核中，要研究蛋白質與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質
詳細介紹
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒DNA 只存在于細胞核內，因此參與轉錄調節(jié)和 DNA 復制的蛋白質主要存在于細胞核中，要研究蛋白質與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的
天然細胞核蛋白質。目前、細胞核蛋白質制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量
樣品時尤其不便，為此本公司開發(fā)了本產品，用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞核蛋
白的微量提取，它具有下列特點：
1. 提取制備過程簡便，只需要一小時。
2. 實驗重復性好，尤其適合同時處理多個樣品。
3. 可用于培養(yǎng)的動物細胞，也可以用于組織細胞。
4. 制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉錄因子活性分析、凝膠阻滯實
驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足跡圖實驗和甲
基化干擾實驗酶活性測定等研究。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 30 次包裝 100 次包裝
溶液 A 91203A 15 mL 50 mL
使用手冊 91203sc 1 份 1 份
運輸及保存 低溫運輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 PBS 緩沖液，PMSF 溶液，DTT 溶液
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒使用方法 1、 對貼壁細胞：將 5×105-7 個細胞培養(yǎng)到覆蓋率為 55-65%，吸棄培養(yǎng)基，用
自備的預冷 PBS 緩沖液洗滌細胞一次，將細胞從壁上小心刮下，轉移到預冷
的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進入第三
步進行后續(xù)處理。
2、 對懸浮細胞：直接將 5×105-7個的懸浮細胞轉移到 1.5 mL 預冷的塑料離心管
中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，用自備的預冷的 PBS 洗滌細胞沉淀一次，
3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進入第三步處理細胞沉淀。說明：
懸浮細胞制備胞漿的效果一般好于貼壁細胞。
3、 在細胞沉淀中加入相當于沉淀細胞體積 5 倍或更多的預冷的溶液 A 重懸細胞，
一般不超過 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在臨用前zui加入終濃度為 0.2
mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不穩(wěn)定，只能
臨用提加入。
4、 冰浴靜置 10 分鐘。
5、 將細胞轉移到預冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器中（溫和破裂細
胞用），上下勻漿 10-15 次（為檢查效果，可取少量裂解物與自備的 0.01%
Trypan Blue 溶液混合，在顯微鏡下觀察，只有破裂細胞的細胞核才能染色，
完整細胞無色。如果需要，可增加勻漿次數(shù)直到 80-90%以上的細胞裂解為
止）。
6、 小心轉移到預冷的離心管中，4℃ 17000g 離心 15 分鐘，線粒體，細胞核等
細胞器將沉淀到管底。
保留上清（胞漿部分）待用。
關聯(lián)產品 10×PBS 緩沖液（100215-250），PMSF 溶液（100833-5），1M DTT 溶液
（60405-10）