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在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前的注意事項(xiàng)

 1、仔細(xì)閱讀闡明書(shū)
 2、承認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)
 3、按闡明書(shū)承認(rèn)全部試劑*（數(shù)量、體積）
 4、標(biāo)本制備要標(biāo)準(zhǔn)，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存
 5、準(zhǔn)備好全部實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等
 6、依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量承認(rèn)所需試劑的量
 7、按闡明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，所需試劑
 ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
 1.正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反響，可采用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
 2.在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括：
 （1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，查詢(xún)其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附功用是否杰出。
 （2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起，查詢(xún)陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1～10μg／ml。