大鼠肺動脈平滑肌原代細胞

大鼠肺動脈平滑肌細胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結構細胞之一，在調控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。肺動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發生發展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發生發展。肺動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數重要動脈疾病的靶細胞。肺動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。

產品名稱：大鼠肺動脈平滑肌細胞

組織來源：肺動脈

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠肺動脈平滑肌細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的優良培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌采用蛋白酶 - 膠原酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

小鼠內皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 試劑盒

People of coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 人皮質酮/腎上腺酮(CO)試劑盒

HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 人酰化刺激蛋白(ASP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PG試劑盒人8異前列腺素(8-iso-PG)試劑盒規格：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)腎組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IgEreceptoraibodyELISAKit小鼠抗IgE受體抗體試劑盒規格：96T/48T

豬膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA 試劑盒

Human macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒

Porcinemelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit 豬黑色素瘤轉移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha1-MGELISAKit大鼠α1微球蛋白

血液0酸二酯酶1(PDE1)活性酶連續循環光譜法定量試劑盒10次

Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)試劑盒

小鼠細胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

小鼠細胞凋亡因子配體 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

小鼠粒細胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 R&D

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

reMOG 1-125 protein 重組髓鞘少樹突膠質細胞糖蛋白1-125 500ugreMOG 1-125 protein 重組髓鞘少樹突膠質細胞糖蛋白1-125

IL12A重組人 IL12A / NKSF1 蛋白 (His 標簽) Protein

ADPRH Protein Human 重組人 ADPRH / ARH1 蛋白 (His 標簽)

CSF3 Protein Human 重組人 G-CSF / CSF3 蛋白

ACVRL1 Others Mouse 小鼠 ALK-1 人細胞裂解液   HuH-6(人肝母細胞瘤細胞)     MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人細胞裂解液   SHZ-88(大鼠癌細胞)   ACHN 人腎細胞腺癌細胞 豬原代肺微血管內皮細胞 小鼠原代頸動脈內皮細胞

大鼠肺動脈平滑肌原代細胞核糖體蛋白L23A(RPL23A)重組蛋白 Recombinant Ribosomal Protein L23A (RPL23A)

ACRV1 Protein Human 重組人 SP-10 / ACRV1 蛋白 (His 標簽)

HAVCR2重組小鼠 TIM3 / HAVCR2 蛋白  Protein

ANGPTL7 Protein Canine 重組狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (His 標簽)

TMED4重組人 TMED4 / ERS25 蛋白 (His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。