大鼠海綿體內皮原代細胞

大鼠海綿體內皮細胞分離自海綿體組織；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構成的血竇結構，它主要包括海綿體內皮細胞、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質的膠原中，而海綿體內皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面，僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內皮細胞與基膜的聯系，破壞海綿體內皮細胞間的緊密連接。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來，從而影響海綿體內皮細胞的純度。因此，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內皮細胞的關鍵。

產品名稱：大鼠海綿體內皮細胞

組織來源：海綿體組織

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠海綿體內皮采用混合酶消化法結合機械分離法、并用內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠海綿體內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA 試劑盒

Human vitamin E (VE) ELISA Kit 人(VE)試劑盒

Humanplacetallactogen,PLELISAKit 人胎盤泌乳素(PL)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancholineacetylase,CHAc試劑盒人乙酰化酶(CHAc)試劑盒規格：96T/48T

總RNA樣品mRNA選擇化試劑盒10次

humanschistosomaELISAKit人血吸蟲(schistosoma)試劑盒規格：96T/48T

植物A(VA)ELISA 試劑盒

Human ai nuclear aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核抗體(ANA)試劑盒

Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 豬血小板活化因子(PAF)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforaFGF-1(Humanacidicfibroblastgrowthfactor1)ELISAKit人酸性成纖維細胞生長因子1

血液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量試劑盒20次

MouseterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit小鼠末端補體復合物C5b-9(TCCC5b-9)試劑盒

直鏈淀粉   250mg

Amylose,fromPotato   1g

抗蛋白酶   250mg

Aipain,Dihydrochloride   1g

IL1RAPL1重組人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

抑制素βE(INHβE)重組蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 標簽)

GFP Protein Aequorea victoria 重組水母 GFP 蛋白

C6大鼠膠質瘤細胞 C6 rat glioma cell DMEM+10% FBS  小鼠小梁網細胞   蚊子幼蟲體細胞;Aedes albopictus clone C6/36 人肺癌細胞，NCI-H1299細胞 A-431(表皮癌細胞)  中國倉鼠肺細胞;V79  COS-7 非洲綠猴SV40 小鼠原代子宮平滑肌細胞 兔原代中耳上皮細胞

大鼠海綿體內皮原代細胞BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關蛋白(抗原)

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 標簽)

MDGA2重組小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)

LRP10重組人 LRP10 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。