大鼠脊髓成纖維原代細胞

大鼠脊髓成纖維細胞分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經結構，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發出成對的神經，分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形（蝴蝶型）灰質區，主要由神經細胞構成；在灰質區周圍為白質區，主要由有髓神經纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的脊髓成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。脊髓成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態；合成和釋放細胞外基質；組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

產品名稱：大鼠脊髓成纖維細胞

組織來源：脊髓組織

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態最佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠脊髓成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠脊髓成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

小鼠(HYD)ELISA 試劑盒

Human urinary free coisol (UFC) ELISA Kit 人尿游離(UFC)試劑盒

HumanMyosinlightChain,MLCELISAKit 人肌球蛋白輕鏈(MLC)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineapigovalbuminspecificIgG,OVAsIgG試劑盒豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVAsIgG)試劑盒規格：96T/48T

真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒50次

Mousebonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit小鼠骨形成蛋白(BMPs)試劑盒規格：96T/48T

豚鼠白介素13(IL-13)試劑盒 ，英文名： IL-13 ELISA Kit

Human aryl hydrocarbon receptor (AhR) ELISA Kit 人芳香烴受體(AhR)試劑盒

rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M

細菌異化型鹽還原酶活性比色法定量試劑盒20次

rabbitEsadiol,E2ELISAKit兔子雌二醇(E2)試劑盒規格：96T/48T

山羊β內啡肽(β-EP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

內皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

SCGB1A1重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein

Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)

MAG重組人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL5RA Protein Human 重組人 IL5Ra / CD125 蛋白

GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白

CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細胞裂解液   293(人胚細胞)     肺成纖維細胞Many   中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF  人羊膜細胞 小鼠原代主動脈瓣膜間質細胞 兔原代胎盤間充質干細胞

大鼠脊髓成纖維原代細胞CD146/MCAM 黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗原 0.5mgCD146/MCAM 黑色素瘤細胞粘附分子CD146抗原

ALDH3A1 Protein Human 重組人 ALDH3A1 蛋白 (His 標簽)

CLEC14A重組小鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (His 標簽) Protein

EPHA3 Protein Rat 重組大鼠 EphA3 蛋白 (His 標簽)

PHOSPHO1重組人 PHOSPHO1 蛋白 (His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。