大鼠退行性椎間盤髓核原代細胞

大鼠退行性椎間盤髓核細胞分離退行性椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質；周圍部的纖維環，由多層纖維軟骨環按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環之間。由縱橫交錯的纖維網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。

產品名稱：大鼠退行性椎間盤髓核細胞

組織來源：椎間盤

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：基礎培養基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠退行性椎間盤髓核細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

大鼠粒細胞明膠酶關聯脂質運載蛋白(NGAL)試劑盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)試劑盒

MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相關因子配體(FASL)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168

B12比色法定量試劑盒20次

ELISAKitHpt/HP大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白

小鼠游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗組蛋白抗體(AHA)試劑盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人降壓素()試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8異前列腺素

異硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)試劑盒規格：96T/48T

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠0酸化細胞外信號調節激酶(pERK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠轉酶/谷轉酶(ALT/GPT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

FCGR2重組小鼠 CD32 / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標簽) Protein

ADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 0.5mgADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 ) 新型金屬基質蛋白酶(抗原)

SULT1A3重組人 SULT1A3 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標簽)

CHODL Protein Rat 重組大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (His 標簽)

DCBLD2 Others Human 人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 人細胞裂解液   ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液   真皮成纖維細胞Many   中國倉鼠卵巢細胞-二氫還原酶缺陷型;CHO/dhFr 小鼠原代膀胱基質成纖維細胞 兔原代結膜囊成纖維細胞

大鼠退行性椎間盤髓核原代細胞內分泌腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標簽)

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。