化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔心臟微血管內皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔心臟微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔心臟微血管內皮原代細胞 | 組織來源 | 心臟 |
英文名稱 | Rabbit Cardiac Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8142 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔心臟微血管內皮細胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構成，左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以氧和各種營養物質，并帶走代謝的終產物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內皮細胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管疾病的發病機制中有重要病理生理學意義。近年來大量研究表明，心肌微血管內皮細胞的功能和病理改變直接影響心肌細胞功能，也是諸多毒素、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細胞模型在心肌缺血-再灌注發病機制和細胞間旁分泌細胞生長因子研究中起著重要作用。
培養信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：內皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔心臟微血管內皮細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
小腸隱窩上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 胰島素受體底物-3抗體 |
蛋白酪酸酶受體PCPTP1抗體 | cereblon蛋白抗體 |
FOXRED2蛋白抗體 | 髓過氧化物酶抗體 |
嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗體 | 轉錄因子ETV6抗體 |
補體C2b鏈多肽抗體 | 熱休克蛋白β7抗體 |
ERP27 Others Human 人 ERP27 人細胞裂解液 (陽性對照) | 人胚腎細胞;293 Cells, low passage 人心室肌細胞培養基 100mL |
人肺成纖維細胞RNAHPF miRNA5 μg | IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NRP1 Others Human 人 NRP1 / Neuropilin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) | TYRP1 Others Human 人 P1 / TYRP1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
VNN2 Others Human 人 VNN2 / Vanin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF4 Others Human 人 TNFRSF4 / CD134 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R084大鼠骨骼肌細胞培養基100mL | 兔心臟微血管內皮原代細胞髓過氧化物酶抗體 |
IM-9(人外周血B淋巴細胞) 5×106cells/瓶×2 遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌 | 山羊皮膚成纖維樣細胞;DG-S1 |
LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 | 97H人肝癌細胞 97H human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS |
人食道上皮細胞(HEEC)(5×105 ) | 5號染色體開放閱讀框34抗體 |
淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎蛋白抗體 | VCAM1 Others Mouse 小鼠 VCAM1 / CD106 人細胞裂解液 (陽性對照) |
BOLA1蛋白抗體 | 硝基酪抗體 |
G蛋白偶聯受體49抗體 | ERP27 Others Human 人 ERP27 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網