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免疫熒光試劑盒檢測貼壁細胞與懸浮細胞操作指南
閱讀：1473 發布時間：2021-9-2細胞，生物學名詞。構成生物體的基本單位。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質構成，表面有薄膜。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁，細胞壁中常有質體，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養和繁殖等機能。
貼壁細胞：
1. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。
2. 按照特定的實驗目的處理細胞后，吸盡培養液，加入1 ml固定液，固定10分鐘或更長時間(可4°C固定過夜)。
3. 去固定液，用TBST工作液洗3次，每次3~5分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。
4. 用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。
5. 去除封閉液，用稀釋的特定一抗濕盒內37°C避光孵育60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。為增強與一抗的結合，可以4°C孵育過夜。
6. 去除一抗，用TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動。
7. 去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標記的二抗濕盒內37°C避光孵育60分鐘。
8. TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘，期間適當注意避光操作。
9. 復染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min，對標本進行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘，洗滌4次去除多余的DAPI染色液。
10. 滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。
11. 如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光。
懸浮細胞：
A. 離心收集細胞樣品于1.5 ml離心管內，吸除上清后輕輕彈散細胞。
B. 加入0.5 ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間(可4°C過夜)。
C. 離心去固定液，用TBST工作液洗3次，每次3~5分鐘。洗滌期間可以用手或搖床輕輕晃動。
D. 最后一次離心后吸去大部分液體保留約50 μL液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。
E. 稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。如果條件許可，可以使用適當的離心機，通過離心把細胞貼緊在載玻片上。
F. 用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘。
G. 去封閉液，用稀釋的特定一抗濕盒內37°C避光孵育60分鐘。為增強與一抗的結合，可以4°C孵育過夜。
H. 去除一抗，用TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘。
I. 去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標記的二抗濕盒內37°C避光孵育60分鐘。
J. TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘，期間適當注意避光操作。
K. 復染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min，對標本進行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘，洗滌4次去除多余的DAPI染色液。
L. 滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。
M. 如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光。