化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值調(diào)整詳細(xì)步驟
閱讀：17 發(fā)布時間：2025-7-15細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的關(guān)鍵參數(shù)，直接影響細(xì)胞的生長和存活。大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜的pH值范圍為7.2至7.5，但具體值可能因細(xì)胞類型而異。偏離這個范圍，無論是過酸還是過堿，都可能對細(xì)胞產(chǎn)生不利影響，包括細(xì)胞活力下降、新陳代謝異常、酶活性改變，甚至導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。例如，原代細(xì)胞和干細(xì)胞對pH變化更為敏感。
培養(yǎng)基pH值的穩(wěn)定性對于維持細(xì)胞的健康至關(guān)重要。如果pH值下降過快，可能是由于細(xì)胞快速生長產(chǎn)生的酸性副產(chǎn)物（如乳酸），或者培養(yǎng)基更換不及時。這種情況通常會導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變黃，需要及時更換培養(yǎng)基。相反，如果pH值偏高，可能是因為二氧化碳不足或長時間與空氣接觸導(dǎo)致的，這會使培養(yǎng)基偏紅。在某些情況下，細(xì)胞代謝不活躍，如細(xì)胞死亡后，也可能導(dǎo)致pH值升高。
酚紅是一種常用的pH指示劑，添加在培養(yǎng)基中以方便觀察pH變化。然而，某些敏感細(xì)胞系或?qū)嶒炑b置可能需要無酚紅培養(yǎng)基，因為酚紅具有較弱的雌激素樣活性，可能干擾實驗結(jié)果。
調(diào)整培養(yǎng)基pH值時，可以使用NaHCO3作為緩沖劑，其濃度與培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度成正比，通常在2.0 g/L到3.7 g/L之間，對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。對于需要精確控制pH值的培養(yǎng)基，如RPMI1640或F12，可能需要使用HEPES緩沖液來增強緩沖能力，保持pH在7.27.6范圍內(nèi)。
調(diào)整培養(yǎng)基的pH值是一個關(guān)鍵步驟，尤其是在實驗室環(huán)境中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或微生物研究時。以下是調(diào)整培養(yǎng)基pH值的詳細(xì)步驟：
1. 使用PH計或精密PH試紙：首先，需要使用經(jīng)過校準(zhǔn)的PH計或精密的PH試紙來準(zhǔn)確測量培養(yǎng)基的當(dāng)前pH值。對于精確測量，使用PH計是合適選擇，因為它能提供連續(xù)讀數(shù)并適用于各種類型的培養(yǎng)基。
2. 準(zhǔn)備調(diào)節(jié)溶液：根據(jù)培養(yǎng)基的當(dāng)前pH值和目標(biāo)pH值，準(zhǔn)備1N鹽酸（HCl）或1N氫氧化鈉（NaOH）溶液。1N溶液意味著每升溶液含有1摩爾的HCl或NaOH。這些溶液可以用來微調(diào)pH值，使其達(dá)到所需的范圍。
3. 校準(zhǔn)PH計：使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（如pH 4、7和9的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液）來校準(zhǔn)PH計。確保在使用前，電極是干凈的，并且緩沖液的溫度與待測培養(yǎng)基的溫度一致，以避免溫度補償誤差。
4. 加入調(diào)節(jié)溶液：根據(jù)需要，緩慢地向培養(yǎng)基中加入HCl或NaOH溶液，同時持續(xù)攪拌。每次加入后，等待一段時間讓pH值穩(wěn)定，然后再次測量。注意，每種培養(yǎng)基對酸堿的反應(yīng)可能不同，因此可能需要多次調(diào)整。
5. 考慮滅菌后的pH變化：如果培養(yǎng)基需要滅菌，應(yīng)在滅菌前將pH值調(diào)得稍微偏高，因為滅菌過程可能會使pH值下降。對于含碳酸鹽的培養(yǎng)基，滅菌前不加熱溶解可能導(dǎo)致pH偏低，因此在滅菌后需要重新調(diào)整pH。
6. 高壓滅菌后的調(diào)整：如果在滅菌后需要調(diào)整pH值，使用過濾滅菌的HCl或NaOH溶液，以避免再次滅菌導(dǎo)致的過度加熱和可能的pH值變化。
7. 成分影響：注意培養(yǎng)基的成分，如糖類和蛋白胨，它們可能在滅菌過程中影響pH值。含糖量高的培養(yǎng)基可能在滅菌后pH值下降，而含蛋白胨量高的培養(yǎng)基可能變化較小。
8. 測量溫度的考慮：在標(biāo)準(zhǔn)條件下，pH值應(yīng)在25℃下測量，因為溫度會影響pH讀數(shù)。如果在其他溫度下測量，應(yīng)進(jìn)行溫度補償。
9. 避免交叉污染：在調(diào)整pH值時，確保使用的容器和工具是干凈的，避免污染。使用后，電極應(yīng)用蒸餾水沖洗并儲存于飽和KCL溶液中。
10. 記錄和驗證：每次調(diào)整pH值后，記錄調(diào)整前后的pH值和所用的調(diào)節(jié)溶液量，以備后續(xù)參考。確保調(diào)整后的pH值符合標(biāo)準(zhǔn)要求。
通過以上步驟，可以有效地調(diào)整培養(yǎng)基的pH值，確保其適合特定的微生物生長或細(xì)胞培養(yǎng)需求。
在配制培養(yǎng)基時，pH值可能會因過濾而輕微上升，因此在過濾前應(yīng)將pH調(diào)得略低一些。同時，培養(yǎng)基的pH值也可能受到所用水質(zhì)、溫度變化和培養(yǎng)環(huán)境二氧化碳濃度的影響。
總之，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值必須嚴(yán)格控制在適宜范圍內(nèi)，以確保細(xì)胞的健康生長和實驗的準(zhǔn)確性。