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其它elisa試劑盒樣本收集與技術原理

閱讀:227          發布時間:2020-12-2

其它elisa試劑盒原理:
       
        免疫測定技術的基礎在于抗原抗體其它elisa試劑盒之間的特異結合反應,所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。

其它elisa試劑盒樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。

2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。

3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4. 細胞培養上清:取其它elisa試劑盒上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測

6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃(6個月內檢測),避免反復凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。

其它elisa試劑盒技術原理:

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

4. 受檢標本與固相載體其它elisa試劑盒表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,

故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。  

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