紫外可見分光光度計的校準主要是通過對一些有數值型的技術指標測試來進行。如波長準確度、波長重復性、光譜帶寬、雜散光、分辨率、透射比誤差、透射比重復性、噪聲、基線平直性等，這里主要介紹波長準確度和波長重復佳、透射比準確度和透射比重復性兩個項目校準的具體儀器條件或校準步驟。
①波長準確度和波長重復性 若儀器能夠放置低壓汞燈的，按照檢定規程低壓汞燈進行全波長測試，否則可用儀器固有的氘灼測試，取單束光能量方式，掃描速度15nm/min，響應快，小帶寬0.1nm，量程0～100%，對486. 02nm和656. 10nm兩個單峰進行單方向重復掃描3次，測量出譜圖上的2條譜線波長，波長測量的平均值與波長的標準值之差就是波長準確度，測量波長的大值與小值之差就是波長重復性。
②透射比準確度和透射比重復性 取帶寬2nm，用1套標準石英吸收池分別裝空白溶液和質量分數為0．006000%的重鉻酸鉀標準溶液，在35nm，257nm,313nm，350nm四個波長處連續3次測量透射比，與檢定規程中附帶的標準值進行比較，測量平均值與標準值之差就是透射比準確度，測量值的大值與小值之差就是透射比重復性。
影響紫外可見分光光度計光度準確度的主要因素有以下幾個方面：
①儀器的雜散光。
②儀器的光度噪聲。
③儀器的基線平直度。
④儀器的光譜帶寬。不同的光譜帶寬分析誤差不同；不同試樣有不同的*分析測試光譜帶寬。
⑤波長準確度。對同一物質，不同的波長有不同的摩爾吸光系數，即不同的靈敏度。
⑥試樣的來源，包括樣品的制備和取樣的方法（如稱量、容量、溶劑、試劑、pH值、時間、溫度等）。
⑦比色皿的性能，包括比色皿的加工誤差、比色皿的配對、比色皿的玷污等。
由此可知，光度準確度是一個綜合性的性能技術指標。要使用紫外可見分光光度計測得準確可靠的數據，必須注意上述幾個方面的影響。特別是在分析測試時，如何選擇（或設定）這些技術指標是非常重要的。應該指出的是，紫外可見分光光度計在同時給出吸光度誤差和透射比誤差時，兩者不能相互矛盾。
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