果糖二磷酸鈉注射液是一種治療低磷酸血癥的藥物,臨床上常用作心肌 缺血輔助治療藥。低磷酸血癥可在急性情況,如輸血、體外循環(huán)下進(jìn)行手術(shù) 和胃腸外營養(yǎng)時出現(xiàn),也與一些慢性疾病,如慢性酒精中毒、長期營養(yǎng)不 良、慢性呼吸衰竭中碳酸耗竭有關(guān)[1]。果糖二磷酸鈉注射液在臨床中的應(yīng)用很 廣泛,但由于其本身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),果糖二磷酸鈉的測定多采用衍生后紫外分 光光度法;同時在果糖二磷酸鈉的生產(chǎn)過程中可能會引入雜質(zhì),其有關(guān)物質(zhì) 有磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖等,這幾種雜質(zhì)都是強(qiáng)極性化合物,而且含 量很低,在普通反相色譜和示差檢測器中無法檢測。有文獻(xiàn)報道采用紙電泳 法分離苯二胺顯色后檢測的方法,以及薄層色譜法*檢測[2-4],也有文獻(xiàn)采 用固體復(fù)合酶法測定果糖二磷酸鈉的含量[5]。這幾種方法不僅操作繁瑣,且重 復(fù)性和靈敏度存在問題。
本實(shí)驗(yàn)采用離子色譜脈沖安培法分離測定果糖二磷酸鈉和3種有關(guān)物質(zhì), 分離度好,靈敏度高,操作簡便。建立了一種有效檢測果糖二磷酸鈉及其有 關(guān)物質(zhì)的方法。
測試條件 儀器:ICS-5000色譜儀(Thermofisher公司),配四 元梯度泵,ED安培檢測器,AS-AP自動進(jìn)樣器 色譜柱: CarboPac PA 20 保護(hù)柱 6 . 0 µ m , 50×3 mm,( P/N: 060144) CarboPac PA 20 分離柱 6 . 0 µ m , 150×3 mm,( P/N: 060142) 柱溫:30 ℃; 淋洗液:NaOH/ NaOAc梯度淋洗 流速:0.4 mL/min; 定量環(huán):20 µL; 檢測方式:脈沖積分安培檢測(四電位波形)
樣品前處理 樣品稀釋適當(dāng)倍數(shù)后,經(jīng)過0.22 µm尼龍濾膜過濾, 取續(xù)濾液直接上機(jī)分析。
實(shí)際樣品分析 市售果糖二磷酸鈉注射液,稀釋后經(jīng)過0.22 µm濾膜 過濾,按選定的色譜條件進(jìn)行測定,外標(biāo)法定量,其譜 圖見圖2,分析結(jié)果見表2。
結(jié)果和討論 色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化 果糖二磷酸鈉的結(jié)構(gòu)中含有兩個磷酸基團(tuán),可以采用 陰離子交換色譜法對其進(jìn)行分離。同時其有關(guān)物質(zhì)為 磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖,這些結(jié)構(gòu)中均含有羥基, 能夠在安培檢測器上有信號。為了保證色譜峰的分離度和 保留時間的合理性,我們選擇CarboPac PA 20的糖柱和 NaOH/NaOAc梯度淋洗的方式。 在上述色譜條件下幾種 物質(zhì)的色譜圖如下圖(圖1)
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