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RNA的免疫共沉淀分離及檢測實(shí)驗(yàn)原理

2023-4-18 閱讀(355)

非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)使得RNA領(lǐng)域再次成為了生命科學(xué)研究關(guān)注的焦點(diǎn)。因?yàn)镽NA是一種不穩(wěn)定的生物大分子,絕大多數(shù)的RNA都需要與特定的RNA結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合形成RNA/蛋白復(fù)合物才能穩(wěn)定存在于細(xì)胞中;不僅如此,RNA與RNA結(jié)合蛋白之間的動(dòng)態(tài)關(guān)聯(lián)貫穿和伴隨了RNA的轉(zhuǎn)錄合成、加工和修飾、胞內(nèi)運(yùn)輸和定位、功能發(fā)揮及降解的整個(gè)生命循環(huán)。鑒于此,利用RNA結(jié)合蛋白分離或發(fā)現(xiàn)鑒定功能性RNA分子是RNA研究領(lǐng)域中一個(gè)不能缺少的研究方法。簡單地說,就是利用RNA結(jié)合蛋白的抗體免疫沉淀RNA/蛋白復(fù)合物,再從沉淀的RNA/蛋白復(fù)合物中分離得到特定RNA結(jié)合蛋白的RNA;分離得到的RNA可以通過末端標(biāo)記和變性膠電泳對RNA分子的大小進(jìn)行鑒定,也可以利用高通量RNA測序方法對RNA序列進(jìn)行分析。
全部所用的溶液試劑均經(jīng)過DEPC處理或由DEPC水配制。
RNA抽提過種中乙醇漂洗步驟可以省略。
RNA樣品溶解與保存:TE(pH8.0)緩沖液。80℃(如果下一步操作涉及酶反應(yīng))100%de-ionicFormamide(如果下一步是電泳檢測)
熟練的RNA操作非常重要。RNase的污染可通過使用RNAZap處理操作環(huán)境得到降低。




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