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在使用單細胞鋪板可能會出現的問題
閱讀：895 發布時間：2019-10-23
單細胞鋪板是細胞實驗中常見又必須掌握的一門技術，看似簡單，我們卻經常遇到：如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現象，導致我們只能扔掉，重新鋪板。既耽擱時間又浪費了細胞及培養板等資源。歷經多次失敗后，才發現原來單細胞鋪板是有規律可循的，今天我們就聊一聊：細胞鋪板的技巧。
首先，了解一下單細胞鋪板的必要性!
從經濟和的角度來說，需要根據實驗目的選擇不同規格的培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時，通常使用96孔板，一方面可以設置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物，減少實驗誤差。
下面我們再來了解一下單細胞鋪板可能會出現的問題
1、細胞計數前后出現較大誤差?
考慮細胞沉降導致懸液不勻;懸液體積過大或過小;稀釋倍數太高或太低等原因造成。
2、如何克服細胞懸液不均勻的問題?
盡量將細胞吹打為單個，防止抱團，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養基中。
3、一般加多少細胞懸液合適?
由于加入計數室的量，過少會導致計數室內出現氣泡，過多則會使得計數板上的蓋玻片不緊貼計數板，使得高度變高，體積變大;計數室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計數時，細胞稀釋倍數如何控制?
若是計數室細胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個，一些細胞個體小也能達到1000-2000萬，可根據所需細胞數目取出部分作稀釋或連續稀釋后計數。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養基中，混勻后進行計數，計數所得乘以10即為實際細胞密度。
5、計數的原則有哪些?
計數時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下，計左不計右”的統計學原則，遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞。