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單細胞測序的主要步驟和特點介紹
閱讀：2609 發(fā)布時間：2021-6-22
單細胞測序的興起，不僅是新概念炒作，而是在相關(guān)領域，長時間由于技術(shù)的瓶頸很多生物學問題沒有解決，現(xiàn)在突然有一個技術(shù)可以高性價比地解決這些問題，導致這個技術(shù)被大量應用。
以單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)為例開展探討，單細胞轉(zhuǎn)錄組主要包括以下四個步驟，其中關(guān)鍵的一點就是如何進行單細胞的捕獲/分選，這是決定單細胞檢測成本和通量的關(guān)鍵步驟。
主要步驟：
在細胞分選的方法里，主要包括特異性分選和非特意性分選兩類方法，兩類方法的關(guān)系有點類似定量（只針對特定目標基因進行檢測）和轉(zhuǎn)錄組測序。
非特異性選擇的方法則通常都是高通量的方法，一般是用特定的技術(shù)隨機從樣本中捕獲的大量細胞單體，然后直接平行對大量細胞進行獨立的測序，再從大量單細胞數(shù)據(jù)中尋找自己感興趣的細胞類型進行后續(xù)分析。反轉(zhuǎn)錄擴增過程中，每個細胞的cDNA會被接上特異的接頭序列，保證后續(xù)混合測序后還能重新獨立拆分每個細胞的數(shù)據(jù)，芯片由于可以平行進行96個細胞的建庫測序，降低了成本。但是這種方式進行單細胞制備時，每個細胞的裂解和核酸擴增反應都不能很*、*，因此每個細胞最終獲得的基因數(shù)量很有限，一般在1000-2000個左右。而且無法進行細胞篩選，導致大量無用細胞的數(shù)據(jù)被記錄，大大增加了背景噪音信號。如果要增加每個細胞能獲得的基因數(shù)量，必須選擇另一種通量較低的方式進行。
特異性選擇方法，就是用特定標志對特定目標細胞進行挑選，然后對目標細胞開展測序。這種方式雖然通量較低，但是由于每個細胞都是在單獨的PCR管中進行裂解和核酸擴增，每一步的反應都可以進行得很*，因此每個細胞最終能獲得的基因數(shù)等達到10000個左右。另外，由于特異性選擇獲得的單個細胞都是經(jīng)過篩選的目的細胞，因此數(shù)據(jù)質(zhì)量遠高于非特異性選擇的高通量方式。
單細胞測序要獲得最終高質(zhì)量數(shù)據(jù)，我們需要一個好的單細胞分離工具。Namocell單細胞分離儀可以幫助用戶進行快速、高效、輕柔地單細胞分離捕獲。分離后的單個細胞是經(jīng)過篩選的用戶感興趣的目的細胞，并且都具備很好的細胞活性，非常適合進行單細胞測序。