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單克隆篩選方法和途徑介紹
閱讀：4067 發(fā)布時(shí)間：2021-8-21
單克隆篩選是將免疫小鼠的脾細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞，是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù)，篩選系統(tǒng)能夠更少時(shí)間里，快速高效篩選挑取雜交瘤克隆，建立穩(wěn)定細(xì)胞株，干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。
篩選方法有有限稀釋法，半固體培養(yǎng)基挑選法，以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等，這其中有好多需要關(guān)注的點(diǎn)，例如挑選細(xì)胞的參數(shù)，挑選方法本身對細(xì)胞的損傷等，所以說，一個(gè)高效的篩選方法絕對能讓工作效率提高好幾倍。
有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)方法，這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會傷害細(xì)胞，整個(gè)過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的，也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留，因此幾乎是零損傷。不過，這種方法的弊端也是顯而易見，就是效率問題。
首先是鋪板效率，雖然不到一分鐘能將一塊96孔板鋪滿，但是一般來說96孔中有細(xì)胞的概率在2/3左右，其中單個(gè)細(xì)胞的概率就更小了，這些細(xì)胞要經(jīng)過一段時(shí)間的生長，抗體分泌之后，在其上清液中去檢測抗體含量，流程耗時(shí)太長，且效率低下，但是在沒有設(shè)備的時(shí)候，這還是目前好的選擇。
其次，半固體培養(yǎng)基篩選克隆可以從明場和熒光方面觀察克隆形成情況以及克隆表達(dá)量相關(guān)情況，不過類似設(shè)備一般價(jià)格比較昂貴，使用成本較高，通量較低。因此，慢慢地很多用戶都不采用類似的設(shè)備進(jìn)行雜交瘤的單克隆篩選。
另外，就是使用流式細(xì)胞分選儀進(jìn)行單克隆篩選。流式作為細(xì)胞檢測分選的常用設(shè)備，也有用戶拿來做單克隆篩選。流式分選單細(xì)胞的速度很快，差不多2min左右可以鋪完一塊96孔板；同時(shí)，也可以通過熒光篩選細(xì)胞，將表達(dá)量高的細(xì)胞篩選下來。但是流式分選在這個(gè)應(yīng)用上也有不足之處，主要是：1. 流式的分選壓力較大，一般有70psi左右的鞘液壓力施加在細(xì)胞上，導(dǎo)致分選后的細(xì)胞活性差，往往較難生長；2. 流式共用管路，導(dǎo)致細(xì)胞之間存在交叉污染；3. 流式操作復(fù)雜，開始分選前往往需要一個(gè)多小時(shí)進(jìn)行儀器調(diào)節(jié)校準(zhǔn)；4. 儀器體積較大，無法整機(jī)放置于超凈臺，容易造成染菌等情況。
Namocell單細(xì)胞分離儀為單克隆篩選提供了一個(gè)更好的選擇。一次性芯片，保證樣本之間*隔離；儀器體積小巧，可置于超凈臺中 高效分選：96孔板分選不到1min，384孔板4min以內(nèi)，單克隆率超過95%輕松分選：儀器操作簡單，無需操作維護(hù)。