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單細胞鋪板的有關經驗，來一起了解一下吧
閱讀：1344 發布時間：2021-11-20
單細胞鋪板大概是我們常見的一個實驗。現在我們常用的方法就是手動的有限稀釋，但有時候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。為了做好手動的有限稀釋單細胞鋪板，我們需要注意以下事項：
盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時間。
96孔板一般以100微升每孔接種，直接用100微升移液器吸取細胞懸液，沿孔壁（稍離開一點孔底即可，不要離底太高）直接接入，移液器不需*打到，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次敲擊剩余三個邊，靜置約5分鐘，放入37度培養箱。
6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個孔加入少量無血清培養基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板好掌握，效果沒有96孔板好。
培養瓶里面加好細胞以后(比如傳代好/分好細胞以后)，先順時針搖晃3次，馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養箱后,平放著培養瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。
看來為了做好單細胞分離，手動有限稀釋難度還是挺大的。
Namocell單細胞分離儀能快速、高效、輕柔地完成96孔板的單細胞鋪板工作，將制備好的單細胞懸液加入到儀器，一分鐘左右就能鋪完1塊96孔板，并且整版單細胞的效率能達到90%左右。
以上就是單細胞鋪板的有關經驗，希望對您有所幫助