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單細胞柔性分選系統結合CRISPR Cas9技術新應用
閱讀：150 發布時間：2024-5-27
近期，一篇文章報道了巨噬樣細胞的SAMHD1基因編輯最新進展，揭示了SAMHD1磷酸化調控、HIV-1限制和細胞dNTP水平之間的復雜關系。
作者報道了BLaER1細胞作為一種新的人類巨噬樣細胞HIV-1感染模型結合CRISPR/Cas9敲入(KI)技術將特異性突變引入 SAMHD1位點以研究生理背景下的突變。轉分化的BLaER1細胞含有活性去磷酸化的SAMHD1，可阻斷HIV-1報告病毒的感染。正如預期的那樣，純合子T592E突變，而不是T592A，緩解了HIV-1逆轉錄的阻滯。將VLP-Vpx共同遞送到SAMHD1 T592E KI 突變細胞中并沒有進一步增強HIV-1感染，這表明缺乏獨立于T592去磷酸化的SAMHD1介導的額外抗病毒活性。T592E KI細胞保留的dNTP水平與WT細胞相似，表明SAMHD1的抗病毒和dNTP酶活性解耦。SAMHD1中催化位點的完整性對于抗病毒活性至關重要，然而在攜帶催化核心突變的細胞中觀察到HIV-1 限制與整體細胞dNTP水平的低相關性?？傊?，強調HIV-1限制，SAMHD1酶功能和T592磷酸化調節之間關系的復雜性，為內源性和生理背景下的研究提供了新的工具。
圖3. CRISPR/Cas9敲入產生SAMHD1突變體的流程
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