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01
Nucleofection™核轉(zhuǎn)的處理 –
簡(jiǎn)單的操作方案
步驟一：
獲取目標(biāo)細(xì)胞
步驟二：
混合和結(jié)合
轉(zhuǎn)移至Lonza認(rèn)證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中
步驟三：
選擇Nucleofector™程序，放入電轉(zhuǎn)耗材，按下開始按鈕
步驟四：
用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細(xì)胞轉(zhuǎn)移出來(lái)
步驟五:
轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中。Nucleofection™電轉(zhuǎn)后3-8小時(shí)即可檢驗(yàn)
02
提高Nucleofection™核轉(zhuǎn)效率
小技巧：
1.準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡。
2.使用傳代次數(shù)少并具有融合度或密度（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)）的細(xì)胞。
3.限制胰蛋白酶暴露時(shí)間，仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分離情況。
4.根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù)；所用細(xì)胞過(guò)少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加。
5.采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化；請(qǐng)通過(guò)測(cè)定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度。
6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心。
7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液，避免對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭抽吸。
8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基。
•輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉(zhuǎn)耗材底部，收集細(xì)胞
•將細(xì)胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中
•請(qǐng)勿重復(fù)抽吸混合細(xì)胞
