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提高電轉(zhuǎn)染效率的小技巧

2021-11-18  閱讀(557)

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01


Nucleofection™核轉(zhuǎn)的處理 – 

簡(jiǎn)單的操作方案

 

步驟一:

 

獲取目標(biāo)細(xì)胞


 

步驟二:

混合和結(jié)合

 

轉(zhuǎn)移至Lonza認(rèn)證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中


 

步驟三:

選擇Nucleofector™程序,放入電轉(zhuǎn)耗材,按下開始按鈕


 

步驟四:

用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細(xì)胞轉(zhuǎn)移出來(lái)


 

步驟五:

轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中。Nucleofection™電轉(zhuǎn)后3-8小時(shí)即可檢驗(yàn)



 

 

 

02

提高Nucleofection™核轉(zhuǎn)效率

 

小技巧:


1.準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板,并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡。


2.使用傳代次數(shù)少并具有融合度或密度(對(duì)數(shù)生長(zhǎng))的細(xì)胞。


3.限制胰蛋白酶暴露時(shí)間,仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分離情況。


4.根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù);所用細(xì)胞過(guò)少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加。


5.采用高質(zhì)量DNA,使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化;請(qǐng)通過(guò)測(cè)定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度。


6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心。


7.離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液,避免對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭抽吸。


8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后,用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基。

 

輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉(zhuǎn)耗材底部,收集細(xì)胞

 

•將細(xì)胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

 

•請(qǐng)勿重復(fù)抽吸混合細(xì)胞



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