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NK細(xì)胞治療全解析-工藝篇

2024-7-8  閱讀(322)

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隨著NK細(xì)胞治療熱度的持續(xù)攀升,其合規(guī)生產(chǎn)也越來越受重視,本文重點講述了幾個不同來源NK細(xì)胞的工藝開發(fā)案例和未來展望:

一、PB-NK/外周血NK:

*滋養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)

收集健康供體單采血,并從中分離外周血單個核細(xì)胞,再用VarioMACS設(shè)備去除T細(xì)胞后,將其轉(zhuǎn)移到A-350N透氣袋中與輻照后的自體PBMC共培養(yǎng),添加OKT3和IL-2,經(jīng)14天培養(yǎng),可以獲得高純度的NK細(xì)胞(>98%,CD3?CD16+CD56+),且擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)520-860。

*無滋養(yǎng)細(xì)胞

此外,也有研究開發(fā)了無滋養(yǎng)細(xì)胞,符合GMP的NK細(xì)胞規(guī)模化生產(chǎn)工藝。取代滋養(yǎng)細(xì)胞的是可以表達(dá)IL-21和41BB配體的膜顆粒。

首先用CliniMACS Prodigy系統(tǒng)去除CD3+T細(xì)胞,并通過膜顆粒刺激NK細(xì)胞并在Prodigy中初步擴(kuò)增;然后轉(zhuǎn)移到Xuri波浪生物反應(yīng)器中通過灌流培養(yǎng)進(jìn)行規(guī)模擴(kuò)增。

最后,NK細(xì)胞通過LOVO設(shè)備進(jìn)行清洗收獲,并使用CBS 2101降溫儀進(jìn)行低溫保存。該工藝在不到2周的時間內(nèi)可以使PB-NK細(xì)胞擴(kuò)增1000倍,而且NK細(xì)胞在該平臺培養(yǎng)40多天之后,可以實現(xiàn)高達(dá)10^8倍的擴(kuò)增效果,同時保持細(xì)胞毒性潛能。





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