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在細胞與基因治療(CGT)邁向產業化的今天,如何在不依賴病毒載體的前提下,高效遞送復雜構建體,成為工藝開發中的關鍵挑戰。Lonza最新發布的4D-Nucleofector® LV PRO模塊,正是為此而生。
非病毒遞送的“放大難題"
正在被解決
傳統電轉系統在小體積(如20μL或100μL)下表現良好,但一旦放大至臨床所需的10億級T細胞,效率、活性和一致性往往難以維持。LV PRO通過兩種全新耗材——2mL固定體積加樣盒(FV)與20mL流通式加樣盒(FT),實現了從微量到大體積的無縫擴展。
關鍵數據
在20μg/mL mRNA或12μg/mL質粒DNA條件下,LV PRO在2mL和20mL體積中均實現了與100μL參考組相當的轉染效率(GFP+細胞比例)
細胞活性在轉染后24小時仍保持>90%

CRISPR編輯:
效率與一致性的雙重突破
在多個供體的實驗中,LV PRO在CRISPR敲除(TRAC KO)與敲入(RAB11A-GFP KI)中均展現出性能:
敲入效率:在7位供體、13組實驗中,LV PRO的敲入效率與100μL參考組一致,且在不同電轉程序下均表現穩定
一致性:20mL流通式加樣盒在13個連續循環中,敲入效率與回收體積波動極小,表明系統具備高度工藝穩定性
從電轉到擴增:
完整的細胞工程流程驗證
在G-Rex®生物反應器中,LV PRO轉染后的T細胞可實現53–70倍擴增,最終獲得超過4億個活細胞,驗證了其在下游培養中的兼容性與可擴展性。
適配多種構建體與起始材料
無論是3.5kb還是1.4kb的HDR模板,LV PRO均可高效遞送;同時支持不同來源的T細胞(PBMC、CD3+,激活或靜息狀態),為工藝開發提供更大靈活性。
總結
LV PRO,不只是“放大",更是“復制"
Lonza的LV PRO模塊不僅解決了非病毒遞送在大體積下的效率瓶頸,更通過一致性、靈活性與可擴展性,為CGT制造流程提供了真正可復制的解決方案。