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反相離子對色譜法分析奶粉中三聚氰胺
閱讀：984 發布時間：2019-3-27三聚氰胺（Melamine）簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量為66.6％，折合成粗蛋白含量為416.27%，加入寵物飼料和牛奶中可以大幅提高蛋白質測定表觀含量，但食用后可誘發腎衰竭并導致死亡，因此一直禁止在飼料和食品中使用。2007年，國內外發生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關產品被召回。2008年9月，國內發生奶粉中三聚氰胺導致嬰幼兒腎結石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
本文參考農業部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測定方法中的樣品提取純化過程，采用反相離子對色譜法測定奶粉中三聚氰胺含量，重現性好，靈敏度高。
儀器概況
本實驗使用島津Prominence LC-20A液相色譜儀系統。LC-20A是島津制作所投入整體力量開發的新一代液相色譜儀，具有以下特點：*的基本性能，輕松滿足客戶對儀器嚴格的要求；全自動化操作，實現了分析的率；高度對應網絡要求的綜合管理系統，改善分析工作環境。
本次實驗所用儀器的具體配置為LC-20AD輸液泵，DGU-20A3在線脫氣，SIL-20A自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-20A紫外可見檢測器，CBM-20A控制器和LCsolution色譜工作站。
分析方法
色譜柱：Inertsil C8 4.6×250mm 5μm
檢測波長：235nm
流動相：含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液(pH3.0):甲醇=7:3
流速：1mL/min
柱溫：40℃
進樣量：10μL
洗脫方式：等度洗脫。
樣品前處理方法
參考農業部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測定方法中的樣品提取純化過程，并進行適當修改，具體步驟如圖1所示。
圖1 前處理步驟
分析結果
1.保留時間與峰形
圖2為本方法檢測三聚氰胺標樣的典型色譜圖（樣品濃度為1μg/mL）
圖2 三聚氰胺標樣圖譜
由圖2可見，本方法所測三聚氰胺保留時間為11.02min，峰形尖銳，對稱性好。
2.精密度
取濃度為5μg/mL三聚氰胺標樣，連續進樣5次，結果如表1所示。
編號 | 保留時間(min) | 峰面積(μV.S) |
1 | 11.016 | 214256 |
2 | 11.014 | 214205 |
3 | 11.014 | 214183 |
4 | 11.014 | 214292 |
5 | 11.013 | 214189 |
Average | 11.014 | 214225 |
%RSD | 0.01 | 0.022 |
表1 保留時間與峰面積的重現性
由表1結果可見，本方法測定三聚氰胺具有很好的精密度和重現性。
3.標準曲線
取標準品，用緩沖液稀釋成濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標準工作液，分別進樣，得到校準曲線(見圖3)。
圖3 校準曲線
結果表明，該方法線性良好，相關系數為0.9999。
4.加標回收率
取奶粉空白樣品，分別加入不同濃度的三聚氰胺標準工作液，使其三聚氰胺終含量分別為0.5mg/kg，5mg/kg，結果如下：
圖4 空白奶粉
圖5 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺
圖6 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺
扣除空白奶粉后的加樣回收率結果如表2所示。
加樣量(mg/kg) | 計算結果(mg/kg) | 回收率 | 平均回收率% |
0.5 | 0.55 | 96 | 110 |
0.64 | 114 | ||
0.67 | 120 | ||
5.0 | 4.68 | 95.8 | 96.0 |
4.80 | 94.6 | ||
4.95 | 97.6 |
表2 2個不同濃度樣品回收率
5.檢測限和定量限
用軟件計算出奶粉中三聚氰胺含量檢測限為0.026mg/kg，定量限為0.079mg/kg。
6.實際樣品分析結果
按本方法測定某品牌的奶粉，得到的圖譜如圖7所示。兩份重復樣品中測得三聚氰胺的濃度分別為19.1和19.2mg/kg，重現性良好。
圖7 某品牌陽性樣品檢測結果
結論
本方法定量限為0.079mg/kg，具有靈敏度高和重現性好等優點，適用于奶粉中三聚氰胺含量的準確測定，特別是低含量樣品的檢測。