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技術文章

蜂蜜中氯霉素的檢測、確認和定量-Agilent 1260 液相色譜系統

閱讀:605          發布時間:2020-5-21

摘要:本應用簡報介紹了使用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜與 Agilent Ultivo LC/TQ 的聯用系統分析蜂蜜樣品中皮克級的極低含量氯霉素 (CAP)。此方法采用 Agilent Ultivo LC/TQ 開發,盡管該系統體積小巧,但結果毫不遜色。此應用是食品行業中蜂蜜生產、加工和商業化樣品常規檢測的理想選擇,也十分適合用于學術研究目的。使用基于液液萃取 (LLE) 的簡單樣品前處理方法,能夠成功實現基質中 50 ppt 的定量限 (LOQ)。

 

前言: CAP 是一種能夠抑制蛋白質合成的廣譜抗生素,長期接觸會導致罕見且嚴重的血液疾?。ㄔ偕系K性貧血)以及骨髓損傷。由于 CAP 對人體具有明顯的毒性作用,因此食品中的含量不得高于 0.3 ppb 的低性能要求限值 (MRPL)[1,2]。實驗部分本研究采用以下溶劑:乙腈(Honeywell, LC/MS,貨號 34967);甲醇(Honeywell, LC/MS,貨號 34966);水(Millipore, Milli-Q);乙酸乙酯(分析純,Rankem);氯霉素(安捷倫科技公司,貨號 5091- 0591)。CAP 的所有工作稀釋液均采用 100% 甲醇配制。圖 1. CAP 和氘代 CAP HO HO H O O –O + N N Cl Cl HO HO H D D D D D O O –O + N N Cl Cl 氯霉素 D5-氯霉素三重四極桿 LC/MS 系統是美國、歐盟、 FSSAI 和其他國家/地區用于確認蜂蜜中 CAP 的金標準。本應用采用款三重四極桿 LC/MS 系統 Ultivo LC/TQ。使用 Ultivo LC/TQ 獲得的靈敏度優于歐盟食品法規規定的 MRPL。此工作流程僅使用 LLE,而傳統方法需要結合 LLE 和固相萃取 (SPE)。由于省去了 SPE 步驟,我們實現了一種簡單、省時的高性價比解決方案(圖 2)[3,4,5]。通過采用結構相似的 CAP-d5 作為內標以減少變異,這一基于 Ultivo LC/TQ 的解決方案展現出了優異的特異性、線性和穩定性,能夠提供可靠的結果。

 

結果與討論由于規定的 MRPL 為 300 ppt,大多數分析實驗室普遍將 100 ppt 設置為常規 LOQ。所提出的方法的檢測限 (LOD) 為 25 ppt。但是,考慮到蜂蜜產品的多樣性,建議的 LOQ 為 50 ppt。圖 3 的 MRM 色譜圖展示了稀釋劑空白、LOD 和 LOQ。此外,通過進樣各種濃度的 CAP 稀釋液,獲得了可重現的洗脫曲線,如圖 4 所示。表 2 顯示了六次重復測定獲得的 CAP 濃度計算值的變異系數 (CV%) 數據。

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