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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
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1、常規(guī)的細胞凍存主要采用DMSO+血清的方式，賽爾瑞成進行凍存液的無血清、低（無）DMSO、無蛋白這些方向持續(xù)開發(fā)的原因是什么？
細胞凍存液的研發(fā)歷史可以追溯到20世紀(jì)中期，隨著細胞生物學(xué)和低溫生物學(xué)的發(fā)展，凍存液逐漸優(yōu)化和改進。20世紀(jì)60年代，DMSO成為常用冷凍保護劑，廣泛應(yīng)用于細胞凍存。隨后，凍存液中開始添加胎牛血清（FBS）等成分，提供營養(yǎng)和保護。20世紀(jì)80年代，科學(xué)家優(yōu)化凍存液配方，調(diào)整DMSO和血清濃度，減少毒性并提高凍存效果。
DMSO作為常用的冷凍保護劑，在較高濃度或長時間暴露下會對細胞產(chǎn)生毒性，影響細胞活力和功能。因此降低其濃度或?qū)ふ姨娲肥潜匾摹?br/>血清因其成分復(fù)雜、存在批次差異、成分不明確、存在病原體污染風(fēng)險等原因，應(yīng)用無血清凍存液已成為細胞凍存領(lǐng)域主流。
蛋白在凍存液中的添加可能為后續(xù)實驗和監(jiān)管引入不可控的變量，且高質(zhì)量蛋白成本高，往往會提高凍存液的成本。
賽爾瑞成自2018年推出第一款經(jīng)典的無血清細胞凍存液以來，CRD系列無血清細胞凍存液因其過硬且穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量，獲得了國內(nèi)數(shù)百家實驗室和企業(yè)用戶的認(rèn)可，廣泛服務(wù)于國內(nèi)細胞生物學(xué)研究和應(yīng)用。
2、應(yīng)用CRD系列凍存液進行細胞凍存前需要注意什么？
由于各類動物細胞株（系）通常都比較脆弱，對所處的環(huán)境要求較高，而細胞凍存是讓人工干預(yù)，強行讓細胞處于一種缺營養(yǎng)的“冬眠"狀態(tài)，所以凍存之前的細胞狀態(tài)對凍存的效果非常關(guān)鍵，建議凍存之前，務(wù)必讓細胞處于良好的對數(shù)期狀態(tài)，凍存之前細胞存活率應(yīng)接近或達到100%。對于貼壁細胞，凍存之前，胰酶消化要適度，吹散和重懸動作要適當(dāng)，以免損傷細胞狀態(tài)。過度消化或未輕柔吹打和重懸的細胞由于狀況較差，通常不宜再冷凍保存。觀察凍存前的細胞狀態(tài)應(yīng)該在消化重懸完成后進行，以確認(rèn)凍存時的細胞狀態(tài)良好。
3、應(yīng)用賽爾瑞成的CRD系列無血清細胞凍存液發(fā)現(xiàn)有的細胞凍存效果不好？有什么建議？
CRD系列無血清細胞凍存液主要依據(jù)成分的差異進行產(chǎn)品命名，均為通用型細胞凍存液，經(jīng)過廣泛測試驗證，適用于絕大多數(shù)哺乳動物（包括人）原代細胞、傳代細胞系以及雜交瘤細胞的凍存等。
因為細胞來源各異、種類繁多，并且新的細胞株（系）不停的涌現(xiàn)，甚至許多細胞都是經(jīng)過工程化改造的細胞系，我們無法對市場上所有細胞株（系）進行全面驗證。因此，對于某些較為珍貴的細胞，建議用戶先進行短期（如一周以內(nèi)）凍存效果預(yù)實驗，或者同時使用傳統(tǒng)含血清的常規(guī)凍存液進行對比測試，確認(rèn)無誤后再進行正式批量凍存。
4、凍存液瓶底出現(xiàn)沉淀，是不是產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)問題？
凍存液中沉淀的出現(xiàn)一般存在如下三種情況：
（1）溶液配置、過濾分裝過程中，異物的帶入。賽爾瑞成的無血清細胞凍存液的生產(chǎn)過程均嚴(yán)格按照GMP體系進行管理，尤其在產(chǎn)品質(zhì)檢和出庫前會進行雙重質(zhì)檢，在外觀上能夠杜絕此類現(xiàn)象的發(fā)生。這種情況，在我們的產(chǎn)品中罕見發(fā)生。
（2）溶液染菌。賽爾瑞成無血清細胞凍存液生產(chǎn)過程中有一個非常重要的步驟是用0.22μm孔徑濾膜進行除菌過濾，且整個操作過程是在百級的環(huán)境中進行操作。此外，我們會對每批終產(chǎn)品出廠前進行無菌檢測，確保終產(chǎn)品沒有染菌。
為避免客戶在使用凍存液時，產(chǎn)生細菌污染，建議如下：
①在超凈工作臺或生物安全柜中進行操作，同時使用無菌的移液器、吸頭和容器，操作前后用75%乙醇或消毒劑清潔雙手。
②根據(jù)實驗需要，可以將大包裝凍存液分裝成小份進行保存，減少反復(fù)開啟瓶蓋帶來的污染風(fēng)險；
（3）鹽溶液析出
為保證達到更優(yōu)的保護效果，CRD系列無血清細胞凍存液含有維持細胞狀態(tài)良好的復(fù)合鹽離子成分，因此，在低溫保存一段時間后，瓶底可能會出現(xiàn)少量飽和析出的固體鹽沉淀，經(jīng)嚴(yán)格測試，對細胞凍存保護效果無任何不利影響，此時只需取用上清，正常使用即可，或者離心去除沉淀或者用過濾器（0.22μm孔徑濾膜）過濾去除少許沉淀。一般飽和析出不會發(fā)生第二次。
若您在使用賽爾瑞成CRD系列無血清細胞凍存液過程中遇到任何問題，歡迎隨時與我們聯(lián)系。
