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重組人Flt3L是一種重要的細胞因子,其存放條件對保持其活性和穩定性至關重要。1.低溫保存重組人Flt3L通常需要在低溫條件下保存,例如2~8℃的冷藏環境。這有助于減緩蛋白質的降解和變性,從而保持其生物活性。2.避免反復凍融反復凍融會破壞蛋白質的結構,導致其活性降低。因此,Flt3L應避免多次凍融,以保持其最佳活性。3.避免光照長時間的光照,特別是紫外線,可能會引起蛋白質的變性和失活。因此,Flt3L應存放在避光的環境中,例如使用棕色玻璃瓶或其他遮光容器。4.無菌操作在處理和保存重組人Flt3L
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細胞凍存是細胞培養技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法,其中細胞凍存液,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用,因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細胞,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等,從而引起細胞死亡。而細胞凍存液就相當于細胞的保護劑,在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細胞膜對水的通透性,
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重組蛋白表達服務-賽爾瑞成大腸桿菌原核表達系統是較早被采用,也是目前掌握的較為熟悉的蛋白表達系統。大腸桿菌作為用于重組蛋白生產的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養操作簡單、轉化和轉導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規格地生產目的蛋白等優點,而且其表達外源基因產物的水平遠高于其它基因表達系統。因此大腸桿菌是目前應用廣泛的蛋白質表達系統。大腸桿菌原核表達系統也更適合于分子量較小重組蛋白的制備。重組蛋白表達服務-賽爾瑞成的優勢:1.20年的大腸桿菌原核蛋白表達制備的經驗;2.擁有多種自主優化
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重組人BMP4的制備工藝說明如下:1.基因構建與表達載體選擇基因合成或克隆:從人體組織中提取總RNA,通過逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)等技術獲得BMP-4的cDNA。或者根據已知的BMP-4基因序列進行人工合成。將獲得的BMP-4基因片段插入到合適的表達載體中,如質粒載體,構建重組表達載體。常用的表達載體包括pET系列、pcDNA系列等,這些載體通常含有啟動子、選擇標記基因和多克隆位點等元件,以便于后續的基因表達和篩選。表達宿主選擇:可以選擇大腸桿菌、酵母細胞、哺乳動物細胞等作為表達宿主。
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以下是一些檢測重組人BMP4活性的方法:1.細胞水平檢測堿性磷酸酶活性檢測:BMP-4可以誘導細胞產生堿性磷酸酶。將重組人BMP-4與特定的細胞系共同培養,如ATDC-5細胞等,在一定時間后,通過檢測細胞內堿性磷酸酶的活性來反映BMP-4的活性。常用的方法是采用比色法或化學發光法等檢測堿性磷酸酶對特定底物的催化作用,從而確定其活性水平。細胞增殖和分化檢測:BMP-4能夠促進間充質干細胞等向成骨細胞、軟骨細胞等方向增殖和分化。將重組人BMP-4作用于間充質干細胞等靶細胞,經過一段時間的培養后,通過
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重組蛋白純化是生物學研究中的一項關鍵技術,旨在從生物體中分離并純化目標重組蛋白,以便研究其特定功能和結構。重組蛋白純化的意義:1.提高蛋白質純度:通過一系列分離和純化步驟,去除細胞裂解液中的雜質和非目標蛋白,從而獲得高純度的重組蛋白。2.保障實驗結果準確性:高純度的重組蛋白有助于減少實驗誤差,提高實驗數據的可靠性和重復性。3.支持后續研究和應用:純化的重組蛋白可用于結構解析、功能研究、藥物篩選等多個領域的深入研究和應用。以下是對重組蛋白純化要求的分析:1.親和標簽的選擇:選擇親和標簽時需要考慮的
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重組蛋白純化是生物制藥過程中的關鍵步驟,其目的在于從復雜的生物混合物中提取出高純度的目標蛋白。重組蛋白純化的工藝過程涉及多個階段,以下是對這些階段的詳細介紹:1.樣品準備預處理:在準備好所有設備及耗材后,對目的蛋白進行預處理,去除雜質、組織、脂肪等,保證樣品的生物活性。裂解細胞:如果目標蛋白存在于細胞內,需要通過機械或化學方法裂解細胞,釋放出目標蛋白。2.初步分離離心:利用離心技術將大部分細胞碎片和未破裂的細胞分離出去。過濾:通過過濾器進一步去除較大的雜質顆粒。3.層析法純化離子交換色譜:基于蛋
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重組人/小鼠FGF8b重組人/小鼠成纖維細胞生長因子8b背景介紹成纖維細胞生長因子8(fibroblastgrowthfactor8,FGF8)是成纖維細胞生長因子(FGFs)家族的成員之一。在原腸胚時期和與細胞的早期分化過程中起著重要作用,并與腦、顱面器官、臟器、骨骼、四肢的形成有著重要的關系,是胚胎發育中重要的生長因子。在正常成人體內,FGF8于腎臟、前列腺、睪丸、乳腺、骨髓和外周血白細胞中低水平表達。但在前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌與某些炎癥部位FGF8呈現過量表達。進一步研究發現,其對激素依