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上海淳麥生物科技有限公司

JM110 感受態細胞 產品說明書

時間:2019-4-1閱讀:832
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產品規格

JM110:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 

 

 

 

基因型

rpsL (StrRthr leu thi-1 lacgalgalara tontsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15] 

 

 

 

 

產品說明

JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(StrR);是甲基化基因damdcm缺失的菌株,提取得到的質粒DNA,可被對damdcm甲基化敏感的內切酶切割;lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選,但轉化效率不高,一般不用于質粒構建,只適用于質粒轉化。JM110感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19 質粒檢測轉化效率約107 cfu/μg DNA。

 

操作方法

 

1. JM110感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

 

 

注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

 

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