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上海淳麥生物科技有限公司

AGL1農桿菌感受態細胞說明書

時間:2019-5-13閱讀:900
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AGL1農桿菌感受態細胞


AGL1 Chemically Competent Cell

產品編碼:                         保存條件: -80℃   
產品規格:

AGL120×100μl
pCAMBIA2301control vector10ng/ul      10ul

                
AGL1農桿菌感受態細胞基因型;
C58 RecA (rif R/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA (strepR) Succinamopine

AGL1農桿菌感受態細胞簡要說明:
 AGL1菌株為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒 pTiBo542DT-DNA,此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。
pTiBo542DT-DNATi質粒含有篩選標簽:strep,賦予AGL1菌株鏈霉素抗性,適用于水稻、擬南芥、楊樹等植物的轉基因操作,經pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率可達5×103cfu/μg
 
AGL1農桿菌感受態細胞操作說明:

  1.  -80℃保存的農桿菌感受態于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入冰中。
  2.  100μl感受態加1ug(體積不大于10ul)質粒DNA,用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
  3.  加入700μl無抗生素的LBYEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3小時。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天(當平板只含有50ug/ml kan 時,28℃培養48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時,需28℃培養60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養72-90h)。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態細胞培養專家  4006815880

 

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