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熒光PCR凍干保護劑之甘油

閱讀:5397      發布時間:2020-8-3
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多元醇類凍干保護劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側金盞花醇等,這一類凍干保護劑是比較常用較為普遍的凍干保護劑。以甘油作為凍干保護劑來介紹一下在蛋白質凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力,可以進入細胞內部和胞內大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分,從而維持蛋白質、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質的原有結構。此外,甘油還可以起到降低細胞脫水皺縮和緩解復水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團,均能產生“優先水化作用”以及改變體系的玻璃態轉變溫度等,故在發揮保護效果方面和糖類具有一定共性。須知蛋白在使用時候存在凍融情況下建議可以選甘露醇、右旋糖酐40、蔗糖,另外40%-50%的甘油效果也很好。

PCR試劑凍干示例:

(1)將熒光PCR擴增緩沖液、引物、探針、熱啟動Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護劑按照配方進行混合;

(2)凍干保護劑可選用:甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。

(3)將上述混合液灌裝至PCR擴增管或者八聯管中。

(4)進行凍干。(5)出倉進行測試。(6)配方修正。

 

 

 

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